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嗜热杜邦菌α-淀粉酶的定向进化及高效表达
文献摘要：
目的:对嗜热杜邦菌来源α-淀粉酶进行分子改造,以提高其耐热性和产酶水平.方法:基于易错PCR技术构建嗜热杜邦菌来源α-淀粉酶(Td-amy)的随机突变文库,高通量筛选耐热性和比酶活提高的突变体,通过定点突变及同源结构模拟对突变体进行分析,并将其在毕赤酵母中表达.结果:筛选得到一个正向突变体(mTd-amy).该突变体最适温度(60℃)较野生型(55℃)提高了5℃,比酶活(466.3 U/mg)较野生型(227.9 U/mg)提高至2.0倍.经序列对比,mTd-amy有四个氨基酸发生了变化,分别为Ala4Val、Ala122Val、Lys194Arg和Ala468Asp,定点突变结果表明Ala122Val和Ala468Asp位点为影响其比酶活和最适反应温度的关键.进一步将突变体mTd-amy在毕赤酵母中高效表达,经高密度发酵其酶活达64696 U/mL.结论:定向进化获得了嗜热杜邦菌来源α-淀粉酶的正向突变体,该突变体的最适温度和比酶活力均明显提高,为α-淀粉酶的分子改造以及工业化应用等提供了理论参考.
文献关键词：
α-淀粉酶;定向进化;比酶活;定点突变;高密度发酵;嗜热杜邦菌
中图分类号：
作者姓名：
靳燕;李延啸;马俊文;王玉川;闫巧娟;江正强
作者机构：
中国农业大学工学院,中国轻工业食品生物工程重点实验室,北京 100083;中国农业大学食品科学与营养工程学院,北京 100083;南京财经大学食品科学与工程学院/江苏省现代粮食流通与安全协同创新中心,江苏南京 210023
文献出处：
引用格式：
[1]靳燕;李延啸;马俊文;王玉川;闫巧娟;江正强-.嗜热杜邦菌α-淀粉酶的定向进化及高效表达)[J].食品工业科技,2022(13):139-147
A类：
嗜热杜邦菌,mTd,Ala4Val,Ala122Val,Lys194Arg,Ala468Asp
B类：
淀粉酶,定向进化,高效表达,分子改造,耐热性,产酶,易错,技术构建,amy,变文,文库,高通量筛选,比酶活,突变体,过定点,定点突变,结构模拟,毕赤酵母,选得,野生型,反应温度,高密度发酵,酶活力,工业化应用
AB值：
0.187266
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