典型文献
Arg54保守位点对嗜热玫瑰红球菌肌氨酸氧化酶的底物适应性和催化效率的影响
文献摘要：
嗜热玫瑰红球菌肌氨酸氧化酶(thermophilus sarcosine oxidase,TrSOX)是一种N-甲基脱除酶,对底物具有特异的手性选择性并且对高温和有机溶剂具有良好的耐受性.在同源家族中,Arg54是催化中心严格保守的5个残基之一,为了研究该位点对酶学性质的影响并筛选出具有良好催化效率的突变体,在预先构建的木糖诱导质粒pMA5-Pxyl-trsox中进行Arg54位点的定点饱和突变,并将得到的质粒转化到枯草芽孢杆菌WB600中进行表达.在19个突变体中,共有15个突变体可以表达并进行制备,其中几乎所有突变体的粗酶液蛋白含量相较野生型TrSOX都有所降低,只有R54D提高约2.5倍.所有突变体都保持了优异的热稳定性,除R54Q、R54N、R54K、R54D和R54V外,其他大多数突变体的二级结构组成均受到一定影响.突变体对底物的手性特异性与野生型TrSOX相同,能特异性识别N-甲基-L-氨基酸类底物,并能将甲基脱除.R54D和R54K对N-甲基-L-氨基酸类底物的催化效率显著提高,而其他突变体的催化效率降低甚至完全失活.此外,包括R54P、R54K和R54I在内的一些突变体能够识别新的非氨基酸相关底物,如1,2,3,4-四氢异喹啉、1-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉、己内酰胺、2-甲基哌啶、哌啶和(3S)-(+)-3-(甲氨基)吡咯烷等,拓展了 TrSOX的底物适应性.
文献关键词：
嗜热玫瑰红球菌肌氨酸氧化酶;定点饱和突变;N-甲基脱除;酶学性质;保守位点
中图分类号：
作者姓名：
唐萌蔚;黄爱敏;顾正华;辛瑜;张梁
作者机构：
粮食发酵工艺与技术国家工程实验室(江南大学),江苏无锡,214122
文献出处：
引用格式：
[1]唐萌蔚;黄爱敏;顾正华;辛瑜;张梁-.Arg54保守位点对嗜热玫瑰红球菌肌氨酸氧化酶的底物适应性和催化效率的影响)[J].食品与发酵工业,2022(11):1-9
A类：
Arg54,嗜热玫瑰红球菌肌氨酸氧化酶,sarcosine,TrSOX,手性选择性,Pxyl,trsox,R54D,R54Q,R54N,R54K,R54V,R54P,R54I
B类：
保守位点,底物,催化效率,thermophilus,oxidase,脱除,有机溶剂,耐受性,残基,该位,酶学性质,突变体,木糖,质粒,pMA5,定点饱和突变,枯草芽孢杆菌,WB600,粗酶液,蛋白含量,野生型,热稳定性,二级结构,结构组成,成均,特异性识别,氨基酸类,失活,关底,四氢异喹啉,己内酰胺,哌啶,3S,吡咯烷
AB值：
0.182193
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