典型文献
新型天冬氨酸激酶突变株构建及酶学性质表征
文献摘要：
通过定点随机突变技术,提高天冬氨酸代谢途径中首个关键限速酶天冬氨酸激酶(aspartate kinase,AK)的催化活力,减弱或解除代谢产物对其协同反馈抑制,并通过Discovery Studio等软件对其空间结构进行分析,借助分子动力学模拟对其机制进行分析.首先选择ATP附近关键残基位点,在前期T379N/A380C/G171I突变株的基础上进行突变株构建,然后通过高通量筛选,获得酶活力显著提高的突变株T379N/A380C/G 171I/S227D.动力学分析显示,Vmax值增至242.05 U/ (mg·min),较T379N/A380C/G171I突变株(187.88 U/ (mg·min))提高到1.28倍,较野生型(wild type,WT) AK (3.01 U/ (mg·min))提高到80.41倍;Km值减小为1.35 mmol/L,底物亲和力增大.最后通过Discovery Studio软件和分子动力学模拟分析发现,突变后体系状态稳定,与ATP的氢键占有率增加,与底物的结合稳定性增强,有利于催化反应进行.酶学性质研究表明:该突变株T379N/A380C/G171I/S227D的最适反应温度增至30℃,较WT和T379N/A380C/G 171I分别提高5℃和2℃;最适pH值为8.5,较T379N/A380C/G171I (pH 9.0)减小0.5;半衰期为3.9h,较T379N/A380C/G171I延长0.8h;且在不同浓度抑制剂Lys、Thr和Met以及Lys+Thr、Lys+Met、Thr+Met和Lys+Thr+Met不同组合存在情况下,该突变株表现出明显的激活作用,抑制效果减弱显著,激活作用最高143.35％.
文献关键词：
天冬氨酸激酶;定点突变;酶活力;分子动力学模拟;酶学性质
中图分类号：
作者姓名：
樊占青;刘晓婷;魏贞;王哲人;王亚南;高欣;闵伟红
作者机构：
吉林农业大学食品科学与工程学院,小麦和玉米深加工国家工程实验室,吉林长春 130118
文献出处：
引用格式：
[1]樊占青;刘晓婷;魏贞;王哲人;王亚南;高欣;闵伟红-.新型天冬氨酸激酶突变株构建及酶学性质表征)[J].食品科学,2022(02):62-69
A类：
天冬氨酸激酶,T379N,A380C,G171I,171I,S227D,Lys+Thr,Lys+Met,Thr+Met,Lys+Thr+Met
B类：
突变株,酶学性质,性质表征,过定点,酸代谢,代谢途径,限速酶,aspartate,kinase,AK,代谢产物,反馈抑制,Discovery,Studio,分子动力学模拟,ATP,关键残基,高通量筛选,酶活力,动力学分析,Vmax,增至,野生型,wild,type,WT,Km,底物亲和力,后体,氢键,占有率,稳定性增强,催化反应,反应温度,半衰期,9h,8h,不同组合,抑制效果,定点突变
AB值：
0.230164
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