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易错PCR定向进化技术提高蒙古黄芪病程相关蛋白AmPR-10核酸酶活性的研究
文献摘要：
以分子伴侣skp修饰的蒙古黄芪病程相关蛋白AmPR-10(A stragalus membranaceus pathogenesis-related protein-10)全基因为模板,通过易错PCR定向进化技术构建突变体文库,以酵母tRNA为底物建立高通量筛选方法,获得了核酸酶活性提高的AmPR-10突变体.经一轮定向进化后,突变体A4的核酸酶活性比野生型提高45％;测序结果显示,突变体A4基因序列在465位增加了1个碱基A,进而由移码突变引起了多肽序列的提前终止,使得突变体A4 C末端缺失了3个氨基酸;从空间上看,AmPR-10基因的突变减小了其C末端α螺旋对空腔的遮蔽作用,有利于目的蛋白与配体或底物的结合.该研究结果对AmPR-10核酸酶活性机制的探讨具有重要意义,为抗病抗逆黄芪植株的培育奠定了理论基础.
文献关键词：
易错PCR;定向进化;AmPR-10;核酸酶活性
中图分类号：
作者姓名：
王珏;吴娜;张育敏;闫海洋;胡丽丽
作者机构：
山西中医药大学基础医学院 ,山西晋中030600
文献出处：
引用格式：
[1]王珏;吴娜;张育敏;闫海洋;胡丽丽-.易错PCR定向进化技术提高蒙古黄芪病程相关蛋白AmPR-10核酸酶活性的研究)[J].化学与生物工程,2022(02):23-27,51
A类：
AmPR,skp,stragalus
B类：
易错,定向进化,技术提高,蒙古黄芪,病程相关蛋白,核酸酶活性,分子伴侣,membranaceus,pathogenesis,related,protein,全基因,技术构建,突变体,文库,酵母,tRNA,底物,高通量筛选,筛选方法,A4,野生型,基因序列,碱基,移码突变,多肽,肽序列,提前终止,空腔,遮蔽,目的蛋白,抗病抗逆,植株
AB值：
0.290661
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