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近平滑假丝酵母ATCC7330羰基还原酶CpCR突变体酶的稳定性研究
文献摘要：
通过蛋白质理性设计和定点突变技术,在近平滑假丝酵母ATCC 7330羰基还原酶wtCpCR的基础上,构建5个突变体酶A98N、S307N、G262N、S216N和S258N,考察了有机溶剂、温度、剪切力、氧气、辅酶NADPH浓度对突变体酶的稳定性影响.研究表明,A98 N在磷酸盐(potassium phosphate,PB)缓冲溶液中比酶活力提高10％,而S307 N没有酶活力,其他3个突变体比酶活力均有降低;A98 N和G262 N在PB/甲基叔丁基醚的双相体系中界面稳定性比原始酶wtCpCR分别提高1.7和1.4倍;4个突变体酶的耐热特性略有下降,T50值介于31～36℃;在100、200 r/min条件下,4个突变体耐剪切力均增强,在300 r/min条件下G262 N突变酶的耐剪切稳定性比wtCpCR增强1.3倍;G262 N突变酶在有氧条件下的稳定性更好,比野生酶提高1.4倍,半衰期(t1/2)达到11.87 h;辅酶浓度为0～0.4 mmol/L时,G262 N突变酶更加稳定.该研究为该羰基还原酶wtCpCR的多点突变进一步改善酶稳定性提供重要的科学依据,同时可提高该酶在双相体系生物催化工艺的经济性.
文献关键词：
近平滑假丝酵母;羰基还原酶;理性设计;定点突变;酶稳定性
中图分类号：
作者姓名：
龚大春;王德林;万里;刘润;吕育财;罗华军;宋婷
作者机构：
中国轻工业功能酵母重点实验室(三峡大学),湖北 宜昌,443002;三峡大学 生物与制药学院,湖北 宜昌,443002
文献出处：
引用格式：
[1]龚大春;王德林;万里;刘润;吕育财;罗华军;宋婷-.近平滑假丝酵母ATCC7330羰基还原酶CpCR突变体酶的稳定性研究)[J].食品与发酵工业,2022(02):59-64
A类：
ATCC7330,CpCR,wtCpCR,A98N,S307N,G262N,S216N,S258N,A98,S307,G262
B类：
近平滑假丝酵母,羰基还原酶,突变体,稳定性研究,理性设计,定点突变技术,有机溶剂,剪切力,辅酶,NADPH,稳定性影响,磷酸盐,potassium,phosphate,PB,缓冲溶液,中比,比酶活,酶活力,甲基叔丁基醚,双相,界面稳定性,耐热,热特性,T50,耐剪切,剪切稳定性,有氧,半衰期,t1,酶稳定性,生物催化,催化工艺
AB值：
0.23763
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