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黑曲霉β-甘露聚糖酶ManA耐热突变体的筛选
文献摘要：
为了改造黑曲霉(Aspergillus niger)来源的β-甘露聚糖酶ManA,获得耐热性高的突变体.利用易错聚合酶链式反应(PCR)技术对构建的表达质粒pGAPZαA-manA进行随机突变,将突变文库转化至毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115,表达筛选耐热性高的突变体,并进一步对突变位点进行定点突变,筛选其他耐热性高的突变体.结果表明,ManA的H283R与H283K突变体相对于野生型在耐热性方面有显著提升,75℃加热30 min其相对酶活由26.66％分别提升至76.95％和83.57％;在pH 3.0～9.0的条件下,50℃保存24 h,H283K突变体与野生型的相对酶活均在90％以上,H283R突变体在pH 3.0时的相对酶活下降到了84.72％,两个突变体的最适温度、pH及比酶活与野生型没有明显差异.说明β-甘露聚糖酶ManA的283位组氨酸(H283)对其耐热性较为关键,将该位点突变为精氨酸(R)和赖氨酸(K)时,ManA的耐热性得到显著提升.
文献关键词：
β-甘露聚糖酶;耐热突变体;易错PCR;定点突变
中图分类号：
作者姓名：
李珊珊;刘德海;刁文涛;陈晓飞;权淑静
作者机构：
河南省科学院生物研究所有限责任公司,河南郑州 450008;河南省微生物工程重点实验室,河南 郑州 450008
文献出处：
引用格式：
[1]李珊珊;刘德海;刁文涛;陈晓飞;权淑静-.黑曲霉β-甘露聚糖酶ManA耐热突变体的筛选)[J].中国酿造,2022(03):62-68
A类：
ManA,耐热突变体,pGAPZ,manA,H283R,H283K,H283
B类：
黑曲霉,甘露聚糖酶,Aspergillus,niger,耐热性,易错,聚合酶链式反应,质粒,变文,文库,毕赤酵母,Pichia,pastoris,GS115,突变位点,定点突变,野生型,比酶活,组氨酸,该位,位点突变,精氨酸,赖氨酸
AB值：
0.194984
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