研究海栖热袍菌木聚糖酶B(TmXynB)的定向进化、高效表达和应用.构建突变文库后经两轮筛选,获得一个在酸性高温下具有高比活力的突变体(mTmXynB).突变体mTmXynB的最适pH值和最适温度为5.5和90?℃,较野生型的最适pH值和最适温度分别下降了0.5和10?℃,对小麦阿拉伯木聚糖的比活力由529?U/mg提高至1565?U/mg.序列比对表明,mTmXynB中3个氨基酸发生突变,分别为Asn91Ser、Trp129Arg和Arg143Glu.经定点突变实验,Arg143Glu通过改变局部蛋白表面的电荷分布提高了其耐酸性,Trp129Arg通过打破疏水平台降低了酶的最适温度,而Asn91Ser可能通过改变底物结合位点Trp89的构象提高该酶的催化活力.进一步将mTmXynB表达至毕赤酵母,经高密度发酵酶活力达18000?U/mL.突变体mTmXynB和野生型TmXynB分别添加至麦芽糖化过程中,结果表明mTmXynB在150?U/g麦芽添加量时效果最好,可降低45％的过滤时间和8.7％的料液黏度.而TmXynB在600?U/g麦芽添加量时效果最好,分别降低39％和8.1％的过滤速度和料液黏度.因此,突变体mTmXynB在啤酒工业中具有很好的应用前景.

木聚糖酶B;海栖热袍菌;定向进化;高效表达;麦芽糖化

刘学强;江正强;余静;马俊文;杨行;闫巧娟

中国农业大学工学院,中国轻工业食品生物工程重点实验室,北京 100083;中国农业大学食品科学与营养工程学院,北京 100083

食品科学

[1]刘学强;江正强;余静;马俊文;杨行;闫巧娟-.海栖热袍菌木聚糖酶B的分子改造、高效表达及其在啤酒中的应用)[J].食品科学,2022(06):66-73

海栖热袍菌,TmXynB,mTmXynB,Asn91Ser,Trp129Arg,Arg143Glu,Trp89,麦芽糖化

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