典型文献
北京棒杆菌单体天冬氨酸激酶T379N/A380C/T65I/D173G突变体酶学性质表征及工程菌构建
文献摘要：
选取天冬氨酸激酶抑制剂赖氨酸(Lys)的结合位点苏氨酸(Thr) 379和丙氨酸(Ala) 380、底物天冬氨酸(Asp)的结合位点Thr65、既是底物也是ATP结合位点的催化活性中心Asp 173,对4个关键残基位点进行定点饱和突变.采用高通量筛选方法成功构建突变体T379N/A380C/T65I/D 173G,与野生型(wild type,WT)相比,酶活力提高到75.83倍.动力学与酶学性质表征显示:相比于WT,Km值由4.11 mmol/L降低至1.34 mmol/L,表明与底物亲和力增强;n值由1.71减小到1.07,正协同性降低.突变体T379N/A380C/T65I/D 173G最适反应温度由WT的25℃提高到30℃,最适pH值与WT相同均为8.0,半衰期由WT的4.24 h缩短至3.23 h.突变体在0.2～10 mmol/L抑制剂浓度下,抑制作用整体减弱,尤其在Lys和Lys+Thr作用下明显激活.通过无缝克隆技术电转入北京棒杆菌构建工程菌,发酵测得Lys产量相比WT提高83.05％,Thr提高29.36％,甲硫氨酸(Met)提高30.77％,为优化天冬氨酸激酶代谢途径和构建高产天冬氨酸族氨基酸菌株提供参考.
文献关键词：
北京棒杆菌;天冬氨酸激酶;突变体;酶学性质;工程菌构建
中图分类号：
作者姓名：
王亚南;刘晓婷;樊占青;王哲人;高欣;闵伟红
作者机构：
吉林农业大学食品科学与工程学院,小麦和玉米深加工国家工程实验室,吉林长春 130118
文献出处：
引用格式：
[1]王亚南;刘晓婷;樊占青;王哲人;高欣;闵伟红-.北京棒杆菌单体天冬氨酸激酶T379N/A380C/T65I/D173G突变体酶学性质表征及工程菌构建)[J].食品科学,2022(02):100-107
A类：
北京棒杆菌,天冬氨酸激酶,T379N,A380C,T65I,D173G,Thr65,173G,Lys+Thr
B类：
突变体,酶学性质,性质表征,工程菌构建,激酶抑制剂,赖氨酸,结合位点,苏氨酸,丙氨酸,Ala,Asp,ATP,催化活性中心,关键残基,定点饱和突变,高通量筛选,筛选方法,野生型,wild,type,WT,酶活力,Km,底物亲和力,协同性,反应温度,半衰期,无缝克隆技术,转入,甲硫氨酸,Met,代谢途径
AB值：
0.214013
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