典型文献
易错PCR技术提高嗜热酸性Ⅲ型普鲁兰水解酶TK-PUL催化活性的研究
文献摘要：
嗜热酸性III型普鲁兰水解酶TK-PUL在液化条件下可完全水解淀粉为淀粉糖,在"液化糖化一步法"的淀粉制糖工艺中具有巨大的应用潜力.本研究拟采用易错聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术提高TK-PUL的催化活性.经过两轮易错PCR及高通量筛选,获得了催化活性提高的突变体L538D.与TK-PUL相比,L538D以可溶性淀粉为底物的比酶活力提高了50％,以普鲁兰多糖为底物的比酶活力提高了21％;L538D以可溶性淀粉、普鲁兰多糖为底物的kcat/Km值分别提高了44％、27％.即L538D的α-1,4-糖苷键水解活性和α-1,6-糖苷键水解活性均明显提高,并且其α-1,4-糖苷键水解活性的提高幅度更大.同源模建得到的蛋白质分子结构显示,将TK-PUL中Leu538替换为Asp,可能通过缩短氨基酸残基侧链的长度和减弱氨基酸残基的疏水性,提高了催化活性位点Glu538所在loop结构的柔性,从而提高酶的催化活性.本研究结果表明,TK-PUL中Leu538是影响其催化活性的重要氨基酸残基.
文献关键词：
III型普鲁兰多糖水解酶;定向进化;易错聚合酶链式反应(易错PCR);高通量筛选技术;催化活性
中图分类号：
作者姓名：
曾静;郭建军;袁林
作者机构：
江西省科学院微生物研究所,江西南昌 330096
文献出处：
引用格式：
[1]曾静;郭建军;袁林-.易错PCR技术提高嗜热酸性Ⅲ型普鲁兰水解酶TK-PUL催化活性的研究)[J].食品工业科技,2022(18):130-136
A类：
L538D,Leu538,Glu538
B类：
易错,技术提高,嗜热,水解酶,TK,PUL,催化活性,III,液化,淀粉糖,糖化,一步法,制糖,聚合酶链式反应,polymerase,chain,reaction,两轮,突变体,可溶性淀粉,底物,比酶活,酶活力,普鲁兰多糖,kcat,Km,糖苷键,水解活性,同源模建,分子结构,Asp,氨基酸残基,侧链,疏水性,活性位点,loop,糖水,定向进化,高通量筛选技术
AB值：
0.263886
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