典型文献
分子伴侣共表达对重组蔗糖异构酶异源可溶性表达的影响
文献摘要：
蔗糖异构酶(sucrose isomerase,SIase)在异麦芽酮糖的酶法制备中发挥着重要作用.为了提高重组蔗糖异构酶的可溶性表达,作者利用分子伴侣共表达策略将源自Klebsiella sp.LX3的基因Slase进行异源表达并研究了重组酶的酶学性质.利用酶切连接技术构建重组质粒pET-24b-S/ase并转入大肠杆菌E.coliBL21(DE3)中进行表达,发现其主要表达为包涵体.分别将携带4种分子伴侣蛋白基因的质粒(pKJE7、pGro7、pG-Tf2、pTf16)与含有目的基因的重组质粒在大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中共表达,筛选到最佳分子伴侣质粒pGro7且提高了重组SIase的可溶性表达水平,其酶活力为14.8 U/mL,比未进行共表达的工程菌发酵酶活力(3.5 U/mL)有明显提高,进一步利用金属离子螯合层析技术纯化到Slase纯酶,酶学性质研究显示其最适反应温度为 40℃,最适反应 pH 为 6.0.动力学常数 Km 为(179.10±20.65)mmol/L、kcat/Km为(5.44±0.72)L/(mmol.s).产物特异性研究结果显示,随反应温度的提高,产物中异麦芽酮糖和海藻酮糖比例下降,单糖比例提高.利用分子伴侣共表达策略能够提高重组Slase的可溶性表达水平,促进SIase的规模化制备和应用.
文献关键词：
蔗糖异构酶;异源表达;分子伴侣;酶学性质
中图分类号：
作者姓名：
孙佳明;庞焦;高向红;李明玉;王从纲;李宪臻
作者机构：
大连工业大学生物工程学院,辽宁大连116034
文献出处：
引用格式：
[1]孙佳明;庞焦;高向红;李明玉;王从纲;李宪臻-.分子伴侣共表达对重组蔗糖异构酶异源可溶性表达的影响)[J].食品与生物技术学报,2022(10):104-112
A类：
Slase,24b,pKJE7,pGro7,Tf2,pTf16
B类：
分子伴侣,共表达,蔗糖异构酶,可溶性表达,sucrose,isomerase,SIase,异麦芽酮糖,酶法制备,表达策略,Klebsiella,sp,LX3,异源表达,重组酶,酶学性质,连接技术,技术构建,重组质粒,pET,转入,大肠杆菌,coliBL21,DE3,包涵体,伴侣蛋白,目的基因,酶活力,工程菌,金属离子,离子螯合,层析技术,反应温度,动力学常数,Km,kcat,产物特异性,海藻酮糖,单糖,比例提高,规模化制备
AB值：
0.301521
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