典型文献
Met196突变提高Brucella melitensis 7α-羟基类固醇脱氢酶的催化效率和稳定性
文献摘要：
[目的]通过计算机辅助设计,理性提高羊布鲁氏菌7α-羟基类固醇脱氢酶的催化效率和稳定性,实现酶的高效稳定催化合成.[方法]通过同源建模、分子对接和蛋白-配体相互作用分析,理性设计关键位点的定向突变.结合酶学性质测定、酶促反应动力学分析和圆二色谱测定等实验,测定突变酶的催化功能和稳定性.[结果]与野生型7α-羟基类固醇脱氢酶相比,Met196I1e和Met196Val突变酶的酶活提高了 8.33倍和7.41倍,kcat/Km值分别提高了 4.93和4.37倍,Tm值分别提高了 1.75℃和1.10℃.Met19611e和Met196Val突变酶催化底物鹅去氧胆酸,合成产物7-氧代-石胆酸所需时间从野生型的8 h缩短为2 h,最高产率约为91％.通过全原子动力学模拟分析了均方根偏差、均方根波动以及蛋白-配体相互作用,阐明了催化性能提高的分子机制.Met196突变诱导的B环(残基Ala145-Pro 157)和α7螺旋(残基Val249-Gly265)的刚性增强有利于提高蛋白的稳定性,底物与结合位点或活性位点(Tyr208、Lys212)相互作用力的增强有利于改善催化效率.[结论]本研究采用同源建模和定点突变改造7α-羟基类固醇脱氢酶的催化活力和稳定性,为工业上高效稳定催化合成7-氧代-石胆酸奠定了较坚实的基础,同时为类固醇脱氢酶的理性设计提供了理论指导.
文献关键词：
羊布鲁氏菌;7α-羟基类固醇脱氢酶;理性设计;催化效率;稳定性;分子动力学模拟
中图分类号：
作者姓名：
柳志永;张荣珍;徐岩
作者机构：
江南大学生物工程学院,工业生物技术教育部重点实验室,江苏无锡214122
文献出处：
引用格式：
[1]柳志永;张荣珍;徐岩-.Met196突变提高Brucella melitensis 7α-羟基类固醇脱氢酶的催化效率和稳定性)[J].微生物学报,2022(05):1769-1783
A类：
Met196,melitensis,Met196I1e,Met196Val,Met19611e,Ala145,Val249,Gly265,Tyr208,Lys212
B类：
Brucella,基类,类固醇,醇脱氢酶,催化效率,计算机辅助设计,羊布鲁氏菌,高效稳定,催化合成,同源建模,分子对接,相互作用分析,理性设计,关键位点,酶学性质,酶促反应动力学,动力学分析,圆二色谱,野生型,kcat,Km,Tm,酶催化,底物,鹅去氧胆酸,石胆酸,高产率,均方根偏差,催化性能,性能提高,残基,Pro,高蛋白,结合位点,活性位点,相互作用力,定点突变,分子动力学模拟
AB值：
0.257282
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