典型文献
拟南芥色氨酸氨基转移酶1的原核表达、纯化及活性分析
文献摘要：
表达获得有活性的纯化蛋白是开展蛋白特异性抑制剂筛选的前提.本研究对拟南芥色氨酸氨基转移酶1(tryptophan aminotransferase of Arabidopsis 1,TAA1)进行了原核表达、纯化及活性分析.首先,通过GenBank查找拟南芥TAA1蛋白编码序列,根据大肠杆菌(Escherichia coli)密码子偏好性进行优化后,将目的序列合成并插入带有His标签的原核表达载体pET24a中,构建原核表达载体pET24a-GST-EK-His-TAA1.转化大肠杆菌BL21(DE3)后,分别给予不同诱导方式(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropylβ-D-thiogalactoside,IPTG)诱导/TB培养基,IPTG诱导/LB培养基,自诱导)进行诱导和培养,诱导产物经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定,发现利用自诱导表达系统、37℃条件下诱导表达16 h表达量最高,并且表达的融合蛋白主要为可溶性形式.选取此最优的表达方式进行放大表达和纯化,得到的融合蛋白经肠激酶(enterokinase,EK)酶解后进行镍离子亲和层柱纯化,最终得到大小正确的单一蛋白条带,纯度达78.7％,蛋白量达0.5 mg,说明His-TAA1蛋白被成功表达并纯化回收.体外酶活检测证明此蛋白具有转氨酶活性.该融合蛋白可用于下一步基于分子互作的TAA1蛋白特异性结合小分子化合物的筛选.
文献关键词：
拟南芥色氨酸氨基转移酶1(TAA1);密码子优化;原核表达;蛋白纯化
中图分类号：
作者姓名：
李小芳;方萍萍;王卓毅;徐沛
作者机构：
中国计量大学生命科学学院/浙江省特色农产品品质及危害物控制技术重点实验室,杭州310018
文献出处：
引用格式：
[1]李小芳;方萍萍;王卓毅;徐沛-.拟南芥色氨酸氨基转移酶1的原核表达、纯化及活性分析)[J].农业生物技术学报,2022(11):2119-2127
A类：
TAA1,enterokinase
B类：
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AB值：
0.35051
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