典型文献
魔芋花叶病毒衣壳蛋白的原核表达和多克隆抗体制备
文献摘要：
采用小RNA测序技术对甘肃省榆中县疑似感染病毒病的当归[(Anigelica sinensis(Oliv.)Diels]样品进行测序鉴定,发现样品中含有魔芋花叶病毒(Konjac mosaic virus,KoMV),通过反转录PCR(RT-PCR)扩增KoMV衣壳蛋白(capsid protein,CP)的cp基因,克隆的KoMV cp基因连接原核表达载体pET-28a(+),导入E.coli RosettaTM(DE3)诱导表达蛋白,在Ni-NTA重力柱层析作用下纯化CP融合蛋白,并以此作为抗原免疫新西兰大耳白兔制备多克隆抗体.序列分析表明:KoMV cp基因片段大小为840 bp,编码280个氨基酸的外壳蛋白;与GenBank已注册同源性较高的KoMV分离物相比,核苷酸序列相似性为85.58％～99.41％,氨基酸序列相似性为89.32％～99.29％;KoMV的病毒种群分布存在明显的区域性和寄主差异.SDS-PAGE显示,不同温度诱导下KoMV CP融合蛋白在E.coli RosettaTM(DE3)中均以包涵体的形式大量表达,融合蛋白分子量为36 ku.间接ELISA和Western blot检测结果显示,制备的多克隆抗体效价达到32 000,能够与感染KoMV的当归叶片和纯化蛋白特异性结合,具有良好的特异性.本研究成功制备了当归KoMV CP融合蛋白的多克隆抗体IgG,为开发KoMV的血清学检测技术及CP蛋白的功能研究奠定了基础.
文献关键词：
当归;魔芋花叶病毒;外壳蛋白;原核表达;多克隆抗体
中图分类号：
作者姓名：
唐国亮;张玉宝;王若愚;王亚军;赵霞;苏学思;金卫杰
作者机构：
中国科学院西北生态环境资源研究院皋兰生态与农业综合试验站,甘肃兰州730000;甘肃省生态农业综合试验野外科学观测研究站,甘肃兰州730000;中国科学院大学,北京100049
文献出处：
引用格式：
[1]唐国亮;张玉宝;王若愚;王亚军;赵霞;苏学思;金卫杰-.魔芋花叶病毒衣壳蛋白的原核表达和多克隆抗体制备)[J].浙江农业学报,2022(11):2471-2481
A类：
魔芋花叶病毒,Anigelica,KoMV,RosettaTM
B类：
衣壳蛋白,多克隆抗体制备,甘肃省榆中县,感染病,病毒病,当归,sinensis,Oliv,Diels,Konjac,mosaic,virus,capsid,protein,CP,cp,原核表达载体,pET,28a,coli,DE3,诱导表达,NTA,柱层析,融合蛋白,新西兰,兰大,白兔,序列分析,bp,外壳蛋白,GenBank,已注册,同源性,分离物,氨基酸序列,毒种,种群分布,寄主,SDS,PAGE,温度诱导,包涵体,分子量,ku,blot,抗体效价,特异性结合,IgG,血清学检测技术,功能研究
AB值：
0.27348
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