典型文献
鸡RNF165蛋白多克隆抗体制备及其生物信息学分析
文献摘要：
[目的]制备鸡环指蛋白165(RNF165)多克隆抗体并对RNF165蛋白进行生物信息学分析,以期为研究鸡RNF165的生物学功能提供参考.[方法]以鸡胚成纤维细胞(DF-1)为试验材料,提取总RNA,反转录获得cDNA,通过PCR扩增RNF165基因,将其连接至pET-28a(+)质粒构建重组表达质粒pET-28a-RNF165.将测序正确的重组表达质粒转化大肠杆菌BL21感受态细胞进行诱导表达,将表达的融合蛋白纯化后按照制定的免疫程序免疫7周龄BALB/c雌鼠.第3次免疫7 d后,分离小鼠血清,用Western blotting检测鼠抗RNF165蛋白多克隆抗体的特异性,间接ELISA法测定其效价.使用在线生物信息学软件对RNF165蛋白理化性质、信号肽、磷酸化位点、亚细胞定位、跨膜结构、二级结构和保守结构域进行分析.[结果]成功扩增得到大小为1 068 bp的RNF165基因.成功构建原核表达载体pET-28a-RNF165,并诱导表达出约43 ku的RNF165蛋白.Western blotting结果显示,制备的鼠抗RNF165蛋白多克隆抗体能特异性识别DF-1细胞中过表达的RNF165蛋白,效价为1∶32 000.生物信息学分析结果显示,RNF165蛋白由350个氨基酸组成,分子质量为39.88 ku,等电点为7.13,不稳定指数为69.87,为亲水性蛋白,不含信号肽和跨膜结构域,有29个磷酸化位点;RNF165蛋白二级结构主要由无规则卷曲、α-螺旋、延伸链和β-转角组成;RNF165出现在细胞核内的概率最高,为47.8％;RNF165蛋白质C-端296-341位氨基酸残基为RING-Ubox超家族保守结构域.[结论]本研究所制备的鼠抗RNF165多抗隆抗体具有较高的反应性和特异性,RNF165蛋白为亲水性蛋白,主要在细胞核内表达,结果可为研究RNF165蛋白的生物学功能提供材料支持.
文献关键词：
环指蛋白165(RNF165);多克隆抗体;生物信息学分析
中图分类号：
作者姓名：
刘超;王后坤;朱丽霖;刘晶;梁雄燕;方春;杨玉莹
作者机构：
长江大学动物科学学院,荆州434025;荆州职业技术学院,荆州434025
文献出处：
引用格式：
[1]刘超;王后坤;朱丽霖;刘晶;梁雄燕;方春;杨玉莹-.鸡RNF165蛋白多克隆抗体制备及其生物信息学分析)[J].中国畜牧兽医,2022(11):4159-4167
A类：
RNF165,Ubox
B类：
多克隆抗体制备,生物信息学分析,生物学功能,鸡胚成纤维细胞,DF,cDNA,pET,28a,质粒构建,重组表达,大肠杆菌,BL21,感受态,诱导表达,融合蛋白,蛋白纯化,免疫程序,周龄,BALB,雌鼠,小鼠血清,blotting,效价,生物信息学软件,信号肽,磷酸化,亚细胞定位,保守结构域,bp,原核表达载体,ku,特异性识别,过表达,氨基酸组成,分子质量,等电点,亲水性,跨膜结构域,蛋白二级结构,无规则,卷曲,细胞核,氨基酸残基,RING,超家族,多抗,反应性
AB值：
0.231174
相似文献
机标中图分类号，由域田数据科技根据网络公开资料自动分析生成，仅供学习研究参考。
