典型文献
橡胶树蛋白激酶HbBIN2基因的克隆、蛋白表达纯化及酶活分析
文献摘要：
橡胶树是天然橡胶的唯一材料来源.寒害是橡胶树面临的主要自然灾害之一,严重限制了橡胶树的生长发育和种植区域分布,克隆和鉴定橡胶树低温应答基因尤为重要.蛋白激酶BIN2(brassinosteroid insensitive 2)是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,在调控植物应对低温胁迫中发挥重要作用,但橡胶树蛋白激酶HbBIN2还未被克隆与鉴定.本研究从橡胶树cDNA中成功克隆出HbBIN2,序列分析表明:HbBIN2的开放阅读框为1143 bp,编码380个氨基酸,蛋白的分子量为42.9 kDa,理论等电点为8.74,是亲水性蛋白且无跨膜结构域.将HbBIN2构建到原核表达载体pET28a上,转化大肠杆菌BL21(DE3)表达菌株,摸索合适的诱导条件后成功诱导表达出HbBIN2蛋白.比较HbBIN2在不同的诱导温度(16、28、37℃)、诱导时间(3、6、12 h)和IPTG浓度(0.1、0.3、0.5 mmol/L)下的表达量,结果表明,HbBIN2在37℃,0.3 mmol/L IPTG诱导12 h的表达量最大.对HbBIN2蛋白体外纯化条件进行探索,结果表明,100 mmol/L咪唑能将目的蛋白完全洗脱.纯化HbBIN2蛋白并进行激酶活性鉴定,结果表明,该蛋白具有激酶活性.该研究为后续HbBIN2蛋白功能分析和橡胶树应对低温胁迫的调控机制研究提供参考,为橡胶树耐寒品种分子育种提供重要的基因资源.
文献关键词：
巴西橡胶树;低温胁迫;BIN2;蛋白纯化;激酶活性
中图分类号：
作者姓名：
郭靖;袁红梅
作者机构：
海南大学热带作物学院/海南省热带生物资源可持续利用重点实验室,海南海口 570228
文献出处：
引用格式：
[1]郭靖;袁红梅-.橡胶树蛋白激酶HbBIN2基因的克隆、蛋白表达纯化及酶活分析)[J].热带作物学报,2022(10):1965-1971
A类：
HbBIN2
B类：
表达纯化,酶活分析,天然橡胶,寒害,种植区域,区域分布,应答基因,brassinosteroid,insensitive,丝氨酸,苏氨酸蛋白激酶,低温胁迫,cDNA,序列分析,开放阅读框,bp,分子量,kDa,等电点,亲水性,跨膜结构域,原核表达载体,pET28a,大肠杆菌,BL21,DE3,诱导条件,诱导表达,诱导时间,IPTG,蛋白体,咪唑,目的蛋白,洗脱,激酶活性,活性鉴定,蛋白功能,功能分析,调控机制,耐寒,分子育种,基因资源,巴西橡胶树,蛋白纯化
AB值：
0.307216
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