典型文献
西伯利亚鲟MHC Ⅱβ克隆、原核表达和多克隆抗体制备
文献摘要：
旨在构建西伯利亚鲟(Acipenser baerii)MHC Ⅱβ基因原核表达载体高效表达,并进行多克隆抗体的制备.根据GenBank西伯利亚鲟MHCⅡβ基因序列设计引物,并加上6-His标签和酶切位点,从西伯利亚鲟脾脏细胞中克隆可读编码框(不含信号肽)部分,克隆并测序鉴定后构建Pet30α-MHC Ⅱβ质粒,转化至大肠杆菌BL21(DE3),异丙基硫代半乳糖苷IPTG诱导表达,经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、免疫印迹(Western Blot)鉴定,诱导表达的融合蛋白大小约为32 ku,能够与His抗体结合,融合蛋白主要以包涵体形式存在,在温度37℃时1 mmol/L的IPTG诱导4 h可以达到最佳表达量.将表达蛋白通过镍柱层析纯化后,制备兔多克隆抗体,抗体效价达到243 W,为深入研究西伯利亚鲟MHC Ⅱβ基因免疫学功能提供参考.
文献关键词：
西伯利亚鲟;MHC Ⅱβ 基因;原核表达;多克隆抗体
中图分类号：
作者姓名：
田照辉;胡红霞;王巍;东天;孙爱
作者机构：
北京农林科学院水产科学研究所暨国家淡水渔业工程技术研究中心,北京100068
文献出处：
引用格式：
[1]田照辉;胡红霞;王巍;东天;孙爱-.西伯利亚鲟MHC Ⅱβ克隆、原核表达和多克隆抗体制备)[J].江苏农业科学,2022(20):201-206
A类：
Pet30
B类：
西伯利亚鲟,MHC,多克隆抗体制备,Acipenser,baerii,原核表达载体,高效表达,GenBank,基因序列,序列设计,引物,His,酶切位点,脾脏,可读,信号肽,质粒,大肠杆菌,BL21,DE3,异丙基,半乳糖,糖苷,IPTG,诱导表达,十二烷基硫酸钠,聚丙烯酰胺凝胶电泳,SDS,PAGE,免疫印迹,Blot,融合蛋白,ku,包涵体,达到最佳,柱层析,层析纯化,抗体效价,免疫学
AB值：
0.299942
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