典型文献
豆类活性肽PA1b在大肠杆菌中的多拷贝串联表达
文献摘要：
为构建能表达串联豆类活性肽PA1 b(pea albumin 1 subunit b)基因的重组大肠杆菌,并进行诱导表达和产物纯化.通过合成PA1b基因,采用同尾酶技术构建1～4拷贝数的串联PA1b基因,分别克隆至pET32a(+)原核表达载体上,转化入大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,亲和层析纯化融合蛋白,肠激酶切除融合标签和切开串联体,获得单体PA1b肽.结果显示,大肠杆菌转化子中的重组质粒pET32a(+)-nPA1b(n=1～4)经PCR及测序验证正确,经1 mmol/L IPTG 25℃诱导8 h,均能以包涵体形式表达出重组融合蛋白.SDS-PAGE分析结果表明,串联拷贝数越多,融合蛋白中PA1 b含量越高.Ni-NTA亲和纯化得到高纯度的4拷贝串联PA1 b融合蛋白,经肠激酶充分酶切、超滤浓缩后获得重组PA1b多肽.获得了表达1～4拷贝串联PA1b基因的重组大肠杆菌,并通过酶解4拷贝PA1b融合蛋白制备了重组PA1 b,为多拷贝法制备PA1 b肽奠定基础.
文献关键词：
PA1b;重组基因表达;多拷贝基因;原核表达
中图分类号：
作者姓名：
黄欣媛;邹礼平;范红波
作者机构：
湖北工程学院湖北省植物功能成分利用工程技术研究中心,湖北孝感432000;湖北职业技术学院医学基础部,湖北孝感432000
文献出处：
引用格式：
[1]黄欣媛;邹礼平;范红波-.豆类活性肽PA1b在大肠杆菌中的多拷贝串联表达)[J].江苏农业科学,2022(15):57-62
A类：
PA1b,同尾酶,nPA1b,重组基因表达
B类：
豆类,活性肽,大肠杆菌,串联表达,pea,albumin,subunit,诱导表达,酶技术,技术构建,拷贝数,别克,pET32a,原核表达载体,化入,BL21,DE3,亲和层析,层析纯化,融合蛋白,肠激酶,融合标签,切开,串联体,转化子,重组质粒,IPTG,包涵体,SDS,PAGE,NTA,亲和纯化,高纯度,超滤浓缩,多肽,酶解,多拷贝基因
AB值：
0.308969
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