典型文献
玉米ZmGAPDH和ZmACTIN的原核表达及抗体制备
文献摘要：
[目的]制备玉米三磷酸甘油醛(GAPDH)和肌动球蛋白(ACTIN)的多克隆抗体,检测热激条件下玉米B73叶片中ZmGAPDH和ZmACTIN的表达,为将ZmGAPDH和ZmACTIN作为非生物胁迫下的内参基因奠定基础.[方法]利用DNAMAN 7对ZmGAPDH和ZmACTIN与不同植物同源蛋白间的氨基酸序列进行比对.通过PCR克隆ZmGAPDH和ZmACTIN的CDS,将其构建到原核表达载体pET-28a中并测序;将重组质粒载体转化大肠杆菌BL21(DE3)和RG2,用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达;将目的蛋白透析纯化后免疫家兔制备多克隆抗体.利用RT-PCR和Western blot检测42℃热激不同时间(0,2,4,8 h)下玉米B73叶片中ZmGAPDH和ZmACTIN mRNA及其蛋白的表达水平.[结果]克隆了 ZmGAPDH和ZmACTIN基因的CDS序列,成功构建了原核表达载体pET-28a-ZmGAPDH和pET-28a-ZmACTIN.在大肠杆菌中表达出了玉米ZmGAPDH和ZmACTIN蛋白,将纯化的蛋白免疫家兔后获得了多抗血清.ZmGAPDH多克隆抗体能清晰检测到4 ng原核表达的ZmGAP-DH 抗原,ZmACTIN 多克隆抗体同样能够清晰检测到 4ng 原核表达的 ZmACTIN 抗原.热激不同时间下玉米B73叶片中的ZmGAPDH和ZmACTIN蛋白表达水平一致,mRNA丰度稳定不变.[结论]成功制备了 ZmGAPDH和ZmACTIN蛋白多克隆抗体;ZmGAPDH和ZmACTIN可以作为内参基因,用于检测热激条件下目标基因的表达水平.
文献关键词：
玉米;三磷酸甘油醛;肌动球蛋白;内参基因;原核表达;多克隆抗体
中图分类号：
作者姓名：
张帅磊;赵天永
作者机构：
西北农林科技大学生命科学学院/旱区作物逆境生物学国家重点实验室,陕西杨凌712100
文献出处：
引用格式：
[1]张帅磊;赵天永-.玉米ZmGAPDH和ZmACTIN的原核表达及抗体制备)[J].西北农林科技大学学报（自然科学版）,2022(06):46-52,62
A类：
ZmGAPDH,ZmACTIN,三磷酸甘油醛,RG2,ZmGAP
B类：
抗体制备,肌动球蛋白,多克隆抗体,热激,B73,非生物胁迫,内参基因,DNAMAN,不同植物,同源蛋白,氨基酸序列,CDS,原核表达载体,pET,28a,重组质粒,大肠杆菌,BL21,DE3,异丙基,半乳糖,糖苷,IPTG,诱导表达,目的蛋白,家兔,blot,多抗,抗血清,4ng,蛋白表达水平,水平一
AB值：
0.161758
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