典型文献
利用菊花B病毒外壳蛋白特异片段进行多克隆抗体的制备与分析
文献摘要：
菊花B病毒(CVB)是乙型线状病毒科(Betaflexiviridae)麝香石竹潜隐病毒属(Carlavirus)成员,在浙江杭白菊基地普遍存在.为了能够特异、快速、简便检测CVB,利用SWISS-MODEL分析CVB外壳蛋白(CP)的三维结构,选择暴露在CVB CP三维空间结构外部的片段,片段之间使用连接肽串联以提高柔性,重复4个片段,根据大肠杆菌密码子的偏爱性将其相应的DNA序列进行优化,将合成的特异DNA序列连接表达载体pET-28a(+),转化至Escherichia coli BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导和Ni-NTA重力柱层析获得了纯化后大小约为14 kDa的融合蛋白;将其作为抗原免疫家兔制备抗血清,纯化获得相应抗体;对获得的抗血清和抗体进行酶联免疫吸附测定(ELISA)和蛋白免疫印迹(WB)检测.间接ELISA检测结果表明,512 000倍稀释的抗血清可检测到1μg 抗原.纯化后最终得到浓度为15 mg·mL-1的抗体,WB检测结果,1∶1 000稀释后的抗体可检测500 pg抗原,且能够特异性结合CVB CP蛋白.本研究制备的多克隆抗体为检测CVB提供了便利,也为后续CVB检测试纸条的开发提供了技术支撑.
文献关键词：
菊花;菊花B病毒;外壳蛋白;原核表达;多克隆抗体
中图分类号：
作者姓名：
王玮;杜雪洁;陈卫良;陈正贤;毛碧增
作者机构：
浙江大学生物技术研究所/农业农村部作物病虫分子生物学重点实验室/浙江省作物病虫生物学重点实验室,浙江杭州 310058
文献出处：
引用格式：
[1]王玮;杜雪洁;陈卫良;陈正贤;毛碧增-.利用菊花B病毒外壳蛋白特异片段进行多克隆抗体的制备与分析)[J].核农学报,2022(12):2358-2365
A类：
Betaflexiviridae,麝香石竹,Carlavirus
B类：
菊花,外壳蛋白,多克隆抗体,CVB,乙型,型线,线状,病毒科,潜隐,杭白菊,SWISS,MODEL,CP,三维结构,三维空间,高柔性,大肠杆菌,密码子,偏爱,表达载体,pET,28a,Escherichia,coli,BL21,DE3,IPTG,NTA,柱层析,kDa,融合蛋白,家兔,抗血清,酶联免疫吸附测定,蛋白免疫印迹,WB,pg,特异性结合,检测试纸,试纸条,原核表达
AB值：
0.330336
相似文献
机标中图分类号，由域田数据科技根据网络公开资料自动分析生成，仅供学习研究参考。
