[目的]将玉米异分支酸合成酶1(ZmICS1)及系统获得抗性缺陷1(ZmSARD1)进行原核表达和纯化,并免疫家兔获得多克隆抗体,为深入研究ZmICS1和ZmSARD1在玉米抵抗病原菌胁迫中的功能奠定基础.[方法]克隆玉米ZmICS1和ZmSARD1基因CDS区,连接到原核表达载体pET-28a,转化大肠杆菌表达菌株Rosett-gami2(DE3),异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达His×6-ZmICS1和His×6-ZmSARD1重组蛋白,以透析纯化后的重组蛋白为抗原免疫家兔,制备多克隆抗体,并进行验证和检测.[结果]成功构建了原核表达载体pET-28a-ZmICS1 和 pET-28a-ZmSARD1,于 37℃、0.84 mmol/L IPTG 在大肠杆菌表达菌株 Rosett-gami2(DE3)中诱导出His×6-ZmICS1和His×6-ZmSARD1重组蛋白.纯化蛋白免疫家兔,所得ZmICS1抗体能够检测到3 ng的His×6-ZmICS1,ZmSARD1抗体能检测到低至0.3 ng的His×6-ZmSARD,且分别能特异性地检测玉米B73原生质体过表达的ZmICS1和ZmSARD1蛋白.[结论]成功制备了玉米ZmICS1、ZmSARD1多克隆抗体,可用于玉米内源ZmICS1和ZmSARD1蛋白含量的检测.

玉米;ICS1蛋白;SARD1蛋白;原核表达;抗体制备

上官晓庆;张春霞;赵天永

西北农林科技大学生命科学学院/旱区作物逆境生物学国家重点实验室,陕西杨凌712100

西北农林科技大学学报（自然科学版）

[1]上官晓庆;张春霞;赵天永-.玉米ZmICS1和ZmSARD1的原核表达及多克隆抗体制备)[J].西北农林科技大学学报（自然科学版）,2022(09):18-24

ZmICS1,ZmSARD1,Rosett,gami2,ZmSARD,ICS1,SARD1

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