典型文献
猪圆环病毒2型病毒样颗粒的制备及免疫原性评价
文献摘要：
旨在利用原核表达系统在大肠杆菌中制备出猪圆环病毒2型(PCV2)病毒样颗粒(VLP),用改良的镍亲和层析法纯化并在小鼠体内评价其免疫原性.通过PCR方法从发病猪中扩增出PCV2的ORF2序列,对其全长进行密码子优化并交由公司合成重组质粒pET-32a-yCap;以BL21(DE3)为表达菌株,经IPTG诱导表达,利用SDS-PAGE与Western blot对Cap蛋白的表达方式及抗原特异性进行鉴定;利用改良的镍亲和层析法纯化带有His-Tag标签的重组蛋白;利用透射电镜观察所纯化的载体融合蛋白能否形成VLP;用 自制的VLP疫苗与PCV2灭活疫苗(ZJ/C株)分别免疫小鼠,利用商业化PCV2 IgG抗体ELISA检测试剂盒评价其免疫原性.结果显示,成功得到PCV2 ORF2序列和重组质粒pET-32a-yCap,重组质粒在大肠杆菌中主要以可溶性蛋白形式表达,蛋白大小为47 kDa;经镍亲和层析法纯化可得到单一的目的蛋白;重组Cap蛋白能与PCV2多克隆抗体及HRP标记的6 * His,His-Tag小鼠单克隆抗体发生特异性结合;经过磷钨酸负染色的蛋白悬液在透射电镜下可观察到大量规则的、直径在17～20 nm的VLP;2种疫苗均能诱导刺激小鼠产生抗体应答反应,VLP组诱导产生的水平更高.综上所述,本研究实现了 PCV2 Cap蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达,经改良的镍亲和层析法可得到单一的 目的蛋白,能够在体外自发的组装成病毒样颗粒,免疫小鼠后可刺激抗体应答反应,可用于制备亚单位疫苗及相关生物制品.
文献关键词：
猪圆环病毒2型;Cap蛋白;可溶性表达;病毒样颗粒
中图分类号：
作者姓名：
赵强;赵云环;郭禹;翟刚;张帅;郭晓旭;范京惠;左玉柱
作者机构：
河北农业大学动物医学院,河北保定 071001;河北省兽医生物技术创新中心,河北保定 071001
文献出处：
引用格式：
[1]赵强;赵云环;郭禹;翟刚;张帅;郭晓旭;范京惠;左玉柱-.猪圆环病毒2型病毒样颗粒的制备及免疫原性评价)[J].中国兽医学报,2022(08):1529-1534
A类：
yCap
B类：
猪圆环病毒,病毒样颗粒,免疫原性,原核表达,表达系统,大肠杆菌,PCV2,VLP,亲和层析,层析法,体内评价,病猪,ORF2,全长,长进,密码子优化,交由,重组质粒,pET,32a,BL21,DE3,IPTG,诱导表达,SDS,PAGE,blot,表达方式,His,Tag,重组蛋白,透射电镜,电镜观察,观察所,融合蛋白,灭活疫苗,ZJ,IgG,检测试剂盒,可溶性蛋白,kDa,目的蛋白,多克隆抗体,HRP,单克隆抗体,特异性结合,磷钨酸,负染,量规,抗体应答,应答反应,综上所述,可溶性表达,经改,装成,亚单位疫苗,生物制品
AB值：
0.302753
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