典型文献
H9N2亚型禽流感病毒NS1蛋白原核表达载体的构建及表达
文献摘要：
为对H9N2亚型禽流感病毒(AIVs)NS1基因进行原核表达,并对表达产物进行抗原性分析,根据NS1基因合成1对特异性引物,进行PCR扩增,将扩增片段连接至PMD18-T载体,通过序列测定和比对筛选出保真基因克隆;将保真基因克隆至pET32a表达载体,构建重组质粒pET32a-NS1后转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,加入IPTG进行诱导表达;并对IPTG使用浓度和诱导时间进行优化,对表达的重组蛋白用His-tag镍柱进行纯化,利用Western Blot和免疫荧光技术对纯化的重组蛋白进行鉴定及免疫原性的测定.结果显示,本试验成功扩增出H9 N2 AIVs的NS1基因,并筛选到保真克隆;带有NS1保真基因的重组载体pET32a-NS1可在大肠杆菌中进行IPTG诱导表达,其中,IPTG最佳使用浓度为2 mmol/L、最佳诱导时间为8 h时表达量最大,并且表达产物主要存在于包涵体中;纯化后的重组蛋白可被抗His标签识别,利用重组蛋白制备的抗体可识别H9N2 AIVs在细胞内表达的NS1蛋白,说明重组蛋白具有良好的免疫原性,该试验为H9N2 AIVs NS1蛋白的功能特性和免疫学研究奠定了基础.
文献关键词：
禽流感病毒;NS1蛋白;原核表达;蛋白纯化;蛋白免疫印迹
中图分类号：
作者姓名：
马平;杨婧;刘宇卓;李银;黄欣梅;赵冬敏;韩凯凯;章丽娇;刘青涛
作者机构：
江苏省农业科学院兽医研究所,江苏南京210014;南京农业大学动物医学院,江苏南京210095
文献出处：
引用格式：
[1]马平;杨婧;刘宇卓;李银;黄欣梅;赵冬敏;韩凯凯;章丽娇;刘青涛-.H9N2亚型禽流感病毒NS1蛋白原核表达载体的构建及表达)[J].江苏农业科学,2022(01):40-44
A类：
PMD18
B类：
H9N2,禽流感病毒,NS1,蛋白原,原核表达载体,AIVs,达产,抗原性,基因合成,特异性引物,序列测定,比对筛选,保真,基因克隆,pET32a,重组质粒,大肠杆菌,BL21,DE3,IPTG,诱导表达,诱导时间,重组蛋白,白用,His,tag,Blot,免疫荧光技术,免疫原性,重组载体,包涵体,标签识别,功能特性,免疫学,蛋白纯化,蛋白免疫印迹
AB值：
0.273064
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