典型文献
中华蜜蜂GABARAP基因克隆、生物信息学分析及原核表达载体的构建
文献摘要：
[目的]对中华蜜蜂(Apis cerana cerana)中自噬相关蛋白Atg8家族成员γ-氨基丁酸相关受体蛋白(gamma-aminobutyric acid receptor type associated protein,GABARAP)基因进行克隆鉴定和生物信息学分析,并在大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行原核表达,以期为后续探究该基因的功能奠定基础.[方法]根据GenBank中西方蜜蜂(Apis mellifera)GABARAP基因序列(登录号:XM_001120069.5)设计引物,采用巢式PCR对中华蜜蜂GABARAP基因进行扩增、克隆;运用生物信息学软件对其氨基酸序列相似性、二级结构、三级结构进行比对和预测分析;构建GABARAP基因原核表达载体,利用Western blotting对GABARAP蛋白进行鉴定后并用IPTG诱导纯化.[结果]经巢式PCR扩增得到中华蜜蜂GABARAP基因序列;使用在线BLAST工具对氨基酸相似性进行分析显示,中华蜜蜂GABARAP与西方蜜蜂、大蜜蜂、小蜜蜂、欧洲熊蜂、东方熊蜂的氨基酸序列相似性为100％;氨基酸序列系统进化树显示,中华蜜蜂与西方蜜蜂亲缘关系最近,与秀丽隐杆线虫亲缘关系最远.生物信息学分析结果显示,GABARAP基因编码区全长354 bp,编码117个氨基酸,蛋白分子质量为13.99 ku,理论等电点为9.48;GABARAP蛋白二级结构主要由3个α-螺旋、4个p-折叠和6个多肽结合位点构成,二、三级结构预测结果一致;SDS-PAGE分析结果显示,IPTG诱导的GABARAP蛋白分子质量为35 ku;Western blotting鉴定结果证明了 His单克隆抗体可以特异性识别GABARAP蛋白.[结论]本研究成功克隆了中华蜜蜂GABARAP基因,获得了 GABARAP蛋白并进行了生物信息学分析,为进一步研究GABARAP基因及其蛋白在自噬发生中的作用提供了参考.
文献关键词：
中华蜜蜂;GABARAP基因;基因克隆;生物信息学;原核表达
中图分类号：
作者姓名：
于慧敏;吴鹏杰;李南南;谭静;徐书法;武江利
作者机构：
中国农业科学院蜜蜂研究所,农业农村部授粉昆虫生物学重点实验室,北京100093
文献出处：
引用格式：
[1]于慧敏;吴鹏杰;李南南;谭静;徐书法;武江利-.中华蜜蜂GABARAP基因克隆、生物信息学分析及原核表达载体的构建)[J].中国畜牧兽医,2022(01):60-69
A类：
GABARAP
B类：
中华蜜蜂,基因克隆,生物信息学分析,原核表达载体,Apis,cerana,自噬相关蛋白,Atg8,氨基丁酸,受体蛋白,gamma,aminobutyric,acid,receptor,type,associated,protein,大肠杆菌,BL21,DE3,感受态,GenBank,中西方,西方蜜蜂,mellifera,基因序列,登录号,XM,引物,生物信息学软件,氨基酸序列,三级结构,预测分析,blotting,IPTG,BLAST,小蜜蜂,熊蜂,系统进化树,亲缘关系,秀丽隐杆线虫,最远,基因编码,编码区,全长,bp,分子质量,ku,等电点,蛋白二级结构,折叠,多肽,结合位点,结构预测,SDS,PAGE,His,单克隆抗体,特异性识别
AB值：
0.287611
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