典型文献
嗜热Ⅱ型内含子Tel3c/4c-RT结构域活性位点分析
文献摘要：
[背景]嗜热Ⅱ型内含子是一类由内含子RNA和内含子编码蛋白(intron encoded protein,IEP)组成且在高温条件下能够在染色体上高频移动的反转录转座子,目前已被开发为高效基因打靶工具Thermotargetron,阐明其活性催化位点,对深入研究其"归巢"机制及开发新型遗传工具具有重要意义.[目的]筛选嗜热Ⅱ型内含子Tel3c/4c-RT结构域关键活性位点,并获得失活反转录功能的内含子编码蛋白突变体.[方法]先利用生物信息学技术分析并筛选可能影响Te13c/4c-RT反转录功能的关键氨基酸位点;然后对筛选到的关键氨基酸位点进行定点突变,并以Thermotargetron质粒为基础构建失活反转录功能的突变型嗜热Ⅱ型内含子打靶系统;最后以大肠杆菌lacZ基因为例,通过蓝白斑计数分析突变型Thermotargetron系统的打靶效率,体内验证Tel3c/4c-RT结构域关键活性位点突变对嗜热Ⅱ型内含子打靶效率的影响.[结果]共筛选到15个可能影响反转录活性的氨基酸位点,包括D194、I195、S196、G197、C198、F199、Q241、G242、R274、Y275、A276、D277、D278、L324 和 G325.其中,当 G242 和 R274 这 2 个位点突变后,嗜热Ⅱ型内含子Tel3c/4c的"归巢"效率几乎完全丧失,表明G242和R274是影响嗜热Ⅱ型内含子Tel3c/4c-RT结构域反转录功能的最核心催化位点.[结论]筛选并获得影响嗜热Ⅱ型内含子Tel3c/4c-RT结构域反转录功能的关键催化位点,为深入研究嗜热Ⅱ型内含子的"归巢"机制及其功能应用开发奠定了良好的基础.
文献关键词：
大肠杆菌;嗜热Ⅱ型内含子;Thermotargetron;Tel3c/4c;内含子编码蛋白;反转录结构域
中图分类号：
作者姓名：
花登雄;王鑫鑫;陈峥宏;洪伟;汪依航;俞青凤;谷俊莹;崔古贞
作者机构：
贵州医科大学医学检验学院,贵州贵阳550004;贵州医科大学基础医学院病原生物学重点实验室,贵州贵阳550025;地方病与少数民族疾病教育部重点实验室贵州省医学分子生物学重点实验室,贵州贵阳550004;贵州医科大学附属医院,贵州 贵阳550004
文献出处：
引用格式：
[1]花登雄;王鑫鑫;陈峥宏;洪伟;汪依航;俞青凤;谷俊莹;崔古贞-.嗜热Ⅱ型内含子Tel3c/4c-RT结构域活性位点分析)[J].微生物学通报,2022(08):3049-3061
A类：
Tel3c,内含子编码蛋白,Te13c,D194,I195,S196,G197,C198,F199,Q241,R274,Y275,A276,D277,D278,L324,G325,反转录结构域
B类：
嗜热,4c,活性位点,intron,encoded,protein,IEP,高温条件,频移,反转录转座子,发为,基因打靶,Thermotargetron,归巢,开发新,得失,失活,突变体,利用生物,生物信息学技术,关键氨基酸位点,定点突变,质粒,突变型,大肠杆菌,lacZ,白斑,体内验证,位点突变,转录活性,G242,个位,功能应用,应用开发
AB值：
0.170916
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