典型文献
猪肠黏膜保护因子HO-1的短小芽孢杆菌表达系统建立与分析
文献摘要：
[目的]对猪黏膜保护因子——血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)基因进行克隆及原核表达,为研究高表达HO-1在肠黏膜损伤中的保护作用提供技术支持.[方法]根据GenBank中公布的HO-1序列(登录号:NM_001004027.1),利用Primer Premier 6.0设计1对特异性引物,利用RT-PCR方法扩增HO-1基因片段,将其与pMD19-T克隆载体连接,转化大肠杆菌DH5a感受态细胞,筛选阳性克隆进行PCR鉴定;将载体pNCMO2与重组载体pMD19-T-HO-1进行Sal Ⅰ和Kpn Ⅰ双酶切,使用T4 DNA连接酶连接,利用电击转化技术将重组表达载体pNCMO2-HO-1转入感受态短小芽孢杆菌,使用IPTG进行诱导表达,应用SDS-PAGE和Western blotting分析HO-1在短小芽孢杆菌中的融合表达情况.[结果]猪HO-1基因全长897 bp,编码298个氨基酸.双酶切后在约5 200和897 bp处分别观察到pNCMO2载体片段和HO-1基因片段,证明成功构建基因表达载体pNCMO2-HO-1;电转后的双酶切结果表明,在相同的位置观察到pNCMO2和HO-1片段,证明重组表达载体pNCMO2-HO-1成功导入短小芽孢杆菌.SDS-PAGE和Western blotting鉴定结果发现,在36.5 ku处出现了明显的蛋白印迹,表明成功表达了 HO-1的重组蛋白,且为胞外分泌.[结论]本研究成功构建了 HO-1的重组原核表达载体,pNCMO2-HO-1重组载体可以在短小芽孢杆菌中诱导表达.
文献关键词：
血红素加氧酶1(HO-1);肠黏膜保护因子;短小芽孢杆菌;表达系统;重组蛋白
中图分类号：
作者姓名：
刘靖松;付京城;温丙言;杨彦宾;郭爽;焦显芹;陈瑾;黄若超;王月影;李和平
作者机构：
河南农业大学,农业农村部动物生化与营养重点开放实验室,郑州450046;河南农业大学动物医学院,郑州450046
文献出处：
引用格式：
[1]刘靖松;付京城;温丙言;杨彦宾;郭爽;焦显芹;陈瑾;黄若超;王月影;李和平-.猪肠黏膜保护因子HO-1的短小芽孢杆菌表达系统建立与分析)[J].中国畜牧兽医,2022(06):2064-2071
A类：
肠黏膜保护因子,DH5a,pNCMO2
B类：
猪肠,HO,短小芽孢杆菌,表达系统,血红素加氧酶,heme,oxygenase,肠黏膜损伤,GenBank,登录号,NM,Primer,Premier,特异性引物,pMD19,克隆载体,大肠杆菌,感受态,重组载体,Sal,Kpn,双酶,T4,连接酶,电击转化,重组表达,转入,IPTG,诱导表达,SDS,PAGE,blotting,融合表达,全长,bp,处分,别观,切结,ku,蛋白印迹,重组蛋白,胞外分泌,原核表达载体
AB值：
0.262067
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