为了研究鸡毒害艾美耳球虫表面抗原基因(EnSAG)的功能,以毒害艾美耳球虫(扬州株)第二代裂殖子的总RNA为模板,RT-PCR扩增其EnSAG,连接至pGEM-T-Easy载体,鉴定后构建pET28a(+)-EnSAG表达载体,转化至大肠杆菌BL21,鉴定后进行诱导表达和纯化.用纯化重组蛋白免疫BALB/c小鼠,制备抗EnSAG蛋白的多克隆抗体.利用多克隆抗体,用Western blot技术检测子孢子和第二代裂殖子中的天然EnSAG蛋白.用重组蛋白按高剂量(200μg/羽)、中剂量(100μg/羽)和低剂量(50μg/羽)免疫雏鸡,同时设置未免疫攻虫组和未免疫未攻虫组为对照,以成活率、平均增重、相对增重率、卵囊减少率、病变记分和抗球虫指数(ACI)为指标,评价重组蛋白的免疫保护力.结果显示:该基因全长768 bp,编码255个氨基酸,分子质量24.63 ku;重组蛋白大小约为30 ku,以包涵体形式为多,能被组氨酸单抗和鸡抗毒害艾美耳球虫阳性血清特异性识别;在第二代裂殖子中检测到天然EnSAG蛋白,其分子质量大约为27 ku.各试验组的成活率均为100％;免疫组的平均增重增加,病变记分显著降低(P＜0.05);低剂量组相对增重率最高(86.19％);高剂量组卵囊减少率(61.54％)和ACI值(160.03)最高.本研究结果为进一步探析EnSAG蛋白的功能以及鸡球虫病亚单位疫苗研制奠定了基础.

毒害艾美耳球虫;表面抗原基因;克隆;表达;免疫保护力

张阿敏;李静怡;刘丹丹;高阳;王礼跃;樊峥嵘;李颖珊;冯茜茜;张知之;范雪莲;侯照峰;许金俊;陶建平

扬州大学兽医学院/江苏动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心,江苏扬州 225009

畜牧与兽医

[1]张阿敏;李静怡;刘丹丹;高阳;王礼跃;樊峥嵘;李颖珊;冯茜茜;张知之;范雪莲;侯照峰;许金俊;陶建平-.鸡毒害艾美耳球虫表面抗原基因(EnSAG)的克隆表达及其免疫保护力)[J].畜牧与兽医,2022(10):122-128

表面抗原基因,EnSAG

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