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非洲猪瘟病毒CD2v胞外区蛋白多克隆抗体的制备及其应用
文献摘要：
非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)CD2v蛋白是病毒粒子外层囊膜上的糖蛋白,是介导病毒血细胞吸附和鉴定病毒血清型的关键蛋白,对于ASFV疫苗研发和疫病净化具有重要作用.为制备ASFV CD2v胞外区蛋白多克隆抗体,本研究以NCBI公布的China/2018/AnhuiXCGQ毒株的EP402R基因为研究对象,利用生物信息学软件进行分析,确定蛋白胞外区序列并进行同源性比对,将其进行密码子优化后克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建CD2v胞外区蛋白重组表达质粒His-CD2v-ex-pcDNA3.1(+),转染293 F细胞进行表达.SDS-PAGE和Western blot检测结果显示,重组蛋白在293 F细胞中以分泌形式表达,相对分子质量为63～89 kDa,能够与AS-FV 阳性血清特异性结合.利用Ni-NTA进行亲和层析纯化,将纯化后的蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,通过West-ern blot、免疫过氧化物酶单层试验(IPMA)和间接免疫荧光试验(IFA)鉴定其生物活性,结果显示兔抗ASFV CD2v胞外区蛋白多克隆抗体能够特异性识别PK-15细胞表达的CD2v蛋白,可用于ASFV CD2v蛋白的Western blot、IP-MA和IFA检测.本研究为进一步研究ASFV CD2v蛋白的功能和ASFV诊断方法的建立提供了材料.
文献关键词：
ASFV;CD2v胞外区蛋白;多克隆抗体
中图分类号：
作者姓名：
姜文廷;王嘉宾;石雪建;万博;杜永坤;蒋大伟;姬鹏超;张改平
作者机构：
河南农业大学国家动物免疫学国际联合研究中心,河南郑州450002
文献出处：
引用格式：
[1]姜文廷;王嘉宾;石雪建;万博;杜永坤;蒋大伟;姬鹏超;张改平-.非洲猪瘟病毒CD2v胞外区蛋白多克隆抗体的制备及其应用)[J].中国兽医学报,2022(11):2125-2132
A类：
CD2v,AnhuiXCGQ,EP402R
B类：
非洲猪瘟病毒,胞外区,多克隆抗体,African,swine,fever,virus,ASFV,外层,糖蛋白,毒血,血细胞,附和,血清型,关键蛋白,疫苗研发,疫病净化,NCBI,China,毒株,利用生物,生物信息学软件,行同,同源性,密码子优化,至真,真核表达载体,pcDNA3,重组表达,质粒,His,ex,转染,SDS,PAGE,blot,重组蛋白,相对分子质量,kDa,阳性血清,特异性结合,NTA,亲和层析,层析纯化,家兔,IPMA,间接免疫荧光试验,IFA,特异性识别,PK
AB值：
0.279518
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