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非洲猪瘟病毒E301R蛋白单克隆抗体的制备及其初步应用
文献摘要：
为制备非洲猪瘟病毒(ASFV)E301R蛋白单克隆抗体(MAb),本研究通过原核表达系统表达并纯化了重组E301R蛋白(rE301R).将其免疫BALB/c小鼠并通过间接ELISA方法筛选到1株能够稳定分泌E301R蛋白MAb的杂交瘤细胞株8B3,亚类鉴定结果显示8B3 MAb为IgG1型.利用一系列表达部分重叠的重组E301R片段并经western blot鉴定8B3 MAb识别的抗原表位,结果显示,8B3 MAb识别的抗原表位为1MSEDIRRGPGRPPKKRVVPN20.采用western blot检测制备的8B3 MAb与HEK293T细胞中过表达的E301R蛋白(不同剂量)及ASFV感染猪肺泡巨噬细胞(PAMs)后(感染后不同时间)天然表达的E301R蛋白的反应性;采用间接免疫荧光试验(IFA)检测8B3 MAb与293T细胞中过表达的E301R蛋白的反应性及E301R蛋白在细胞中的定位.Western blot结果显示,过表达E301R蛋白的293T细胞出现了36 ku左右的特异性条带,且随着转染质粒量的增加,蛋白表达量增加;感染ASFV的PAM中(感染后8 h)出现了36 ku左右的特异性条带,且随着感染时间的延长,蛋白表达量增加.IFA结果显示,在过表达E301R蛋白的293T细胞中出现绿色荧光,且其定位于细胞质中.以上结果表明,制备的8B3 MAb既能够与过表达的E301R蛋白,也能够与天然表达的E301R蛋白反应,反应性较强.将8B3 MAb用于免疫共沉淀(Co-IP)试验检测293T细胞中过表达的E301R蛋白和Flag-Agarose结合后与8B3 MAb的反应性.结果显示,8B3 MAb可以检测到结合在Flag-Agarose上的E301R蛋白,出现约36 ku的特异性条带.表明8B3 MAb可以用于Co-IP试验.这些研究结果为进一步研究E301R蛋白的功能奠定实验基础.
文献关键词：
非洲猪瘟病毒;E301R蛋白;单克隆抗体;抗原表位
中图分类号：
作者姓名：
刘学敏;张元峰;王永琦;康力;黄丽;翁长江
作者机构：
中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/基础免疫创新团队,黑龙江 哈尔滨 150069
文献出处：
引用格式：
[1]刘学敏;张元峰;王永琦;康力;黄丽;翁长江-.非洲猪瘟病毒E301R蛋白单克隆抗体的制备及其初步应用)[J].中国预防兽医学报,2022(09):963-969
A类：
E301R,rE301R,8B3,1MSEDIRRGPGRPPKKRVVPN20,Agarose
B类：
非洲猪瘟病毒,单克隆抗体的制备,初步应用,ASFV,MAb,原核表达,表达系统,BALB,杂交瘤细胞株,亚类,IgG1,列表,western,blot,抗原表位,HEK293T,过表达,不同剂量,猪肺泡巨噬细胞,PAMs,反应性,间接免疫荧光试验,IFA,ku,条带,转染,质粒,细胞质,免疫共沉淀,Co,试验检测,Flag
AB值：
0.148928
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