典型文献
非洲猪瘟病毒A137R蛋白单克隆抗体的制备与表位鉴定
文献摘要：
为制备非洲猪瘟病毒(ASFV)A137R蛋白鼠源单克隆抗体(MAb),本研究通过原核系统表达并纯化了重组A137R(rA137R),将其免疫BALB/c小鼠并通过间接ELISA方法筛选到2株能够稳定分泌A137R MAb的杂交瘤细胞株3D1和2C3.亚类试剂盒鉴定结果显示,两株MAb重链亚类均为IgG1,轻链亚类均为Kappa链.采用间接ELISA方法测得MAb 3D1和2C3的腹水效价均高于105,选取效价较高的MAb 3D1用于后续试验.采用western blot检测制备的MAb 3D1与293T细胞中过表达的A137R(不同剂量)及ASFV感染猪肺泡巨噬细胞(PAMs)后(感染后不同时间)天然表达的A137R的反应性;采用间接免疫荧光试验(IFA)检测Mab 3D1与293T细胞中过表达的A137R的反应性.Western blot结果显示,过表达A137R的293T细胞出现了 15 ku左右的特异性条带,且随着转染质粒量浓度的增加,蛋白表达量增加;感染ASFV的PAMs中(感染后8 h)出现了 15 ku左右的特异性条带,且随着感染时间的延长,蛋白表达量增加.IFA结果显示,在过表达A137R的293T细胞中出现绿色荧光.以上结果表明,制备的MAb 3D1既能够与过表达的A137R反应,也能够与天然表达的A137R反应,反应性较强.将MAb 3D1用于激光共聚焦试验中检测ASFV感染PAMs后不同时间A137R的细胞定位;用于免疫共沉淀(Co-IP)试验中检测293T细胞中过表达的A137R和Flag-Agarose结合的反应性.激光共聚焦试验结果显示,ASFV感染PAMs后6h出现绿色荧光,且荧光主要在细胞质中,随着感染时间的延长,绿色荧光逐渐增多增强,表明A137R主要定位于细胞质中.Co-IP试验结果显示,Mab 3D1可以检测到结合在Beads上的A137R,出现约15 ku的特异性条带,表明Mab 3D1可以用于Co-IP试验.利用一系列表达部分重叠的重组A137R片段并经western blot鉴定两株Mab识别的表位;根据western blot结果合成一系列多肽并包被ELISA板,采用间接ELISA方法进一步筛选Mab识别的抗原表位,并利用western blot验证筛选到的抗原表位.结果显示,A137R氨基酸序列中的18NFHRCAWEE26和64AWHEVPECREFI75分别为Mab 3D1和2C3的抗原表位.本研究首次制备了 ASFV A137R蛋白的Mab,并进行了初步应用研究,还对其进行了表位鉴定,为进一步将该MAb利用于ASFV的检测和疫苗研究提供了实验依据.
文献关键词：
非洲猪瘟病毒;A137R蛋白;单克隆抗体;抗原表位
中图分类号：
作者姓名：
向志达;李长尧;张涛清;张元峰;黄丽;杨玉莹;翁长江
作者机构：
中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/基础免疫创新团队,黑龙江 哈尔滨 150069;长江大学动物科学学院,湖北 荆州 434025
文献出处：
引用格式：
[1]向志达;李长尧;张涛清;张元峰;黄丽;杨玉莹;翁长江-.非洲猪瘟病毒A137R蛋白单克隆抗体的制备与表位鉴定)[J].中国预防兽医学报,2022(04):402-410
A类：
A137R,rA137R,3D1,Mab,Agarose,18NFHRCAWEE26,64AWHEVPECREFI75
B类：
非洲猪瘟病毒,单克隆抗体的制备,表位鉴定,ASFV,白鼠,MAb,原核,BALB,杂交瘤细胞株,2C3,亚类,试剂盒,两株,IgG1,轻链,Kappa,腹水,水效,效价,western,blot,293T,过表达,不同剂量,猪肺泡巨噬细胞,PAMs,反应性,间接免疫荧光试验,IFA,ku,条带,转染,质粒,共聚,细胞定位,免疫共沉淀,Co,Flag,6h,细胞质,Beads,列表,多肽,包被,抗原表位,氨基酸序列,初步应用,疫苗研究
AB值：
0.172721
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