旨在研究非洲猪瘟病毒(ASFV)p30蛋白的B细胞抗原表位,本研究制备了 p30蛋白的单克隆抗体(mAb),并以该单克隆抗体为工具进行B细胞抗原表位定位.首先,通过原核表达及Ni柱亲和纯化获得p30蛋白,将纯化蛋白免疫BALB/c小鼠进行杂交瘤细胞制备,通过间接酶联免疫吸附试验(iELISA)筛选出阳性杂交瘤细胞,并以细胞表达的方法制备单克隆抗体;采用间接免疫荧光试验(IFA)和蛋白质免疫印迹(Western blot)对单克隆抗体的特异性进行鉴定.利用IEDB表位预测软件对p30蛋白B细胞抗原表位进行预测,根据预测结果对CP204L基因进行截短表达,利用IFA、Western blot和iELISA对其抗原表位进行鉴定.最后,利用噬菌体十二肽库对制备的p30单克隆抗体进行4轮生物淘选,筛选多肽表位,并与上述基因截短表达筛选方法进行比对.特异性鉴定结果显示,该单克隆抗体能成功识别感染猪肺泡巨噬细胞的ASFV;基因截短表达筛选结果表明,其识别的抗原表位区域为84 M～K142;噬菌体淘选试验结果表明,116TSSFETLFE124为本试验制备的单克隆抗体所识别的p30蛋白抗原表位核心序列,该结果进一步缩小了表位分布范围.本研究制备了 p30蛋白的1株单克隆抗体,并对其抗原表位进行鉴定,为血清学诊断试剂的研发和p30蛋白功能研究奠定基础.

非洲猪瘟病毒;p30蛋白;单克隆抗体;生物淘选;抗原表位

华南农业大学非洲猪瘟防控技术研究中心,广州510642;国家非洲猪瘟区域实验室(广州),广州510642;华南农业大学国家生猪种业工程技术研究中心,广州510642;华南农业大学兽医学院广东省临床重大疾病综合防控重点实验室,广州510642

[1]陈孝军;马俊;陈熊男;梁祎凡;高琦;黄钊;许润达;郑佳琛;郑泽中;张桂红;王衡;龚浪-.1株非洲猪瘟病毒p30蛋白单克隆抗体识别的B细胞抗原表位的鉴定)[J].畜牧兽医学报,2022(07):2239-2251

CP204L,生物淘选,K142,116TSSFETLFE124

非洲猪瘟病毒,p30,单克隆抗体,抗原表位,ASFV,mAb,表位定位,原核表达,亲和纯化,BALB,杂交瘤细胞,间接酶联免疫吸附试验,iELISA,间接免疫荧光试验,IFA,蛋白质免疫印迹,blot,IEDB,表位预测,预测软件,据预测,截短表达,噬菌体,二肽,多肽,筛选方法,特异性鉴定,猪肺泡巨噬细胞,核心序列,分布范围,血清学诊断,诊断试剂,蛋白功能,功能研究

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