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非洲猪瘟病毒DP148R蛋白单克隆抗体的制备与鉴定
文献摘要：
为制备非洲猪瘟病毒(ASFV)DP148R蛋白的单克隆抗体(MAb),本研究构建了重组原核表达质粒pET-28a-DP148R,通过PCR和测序鉴定正确后经原核表达并纯化了重组DP148R蛋白,将其按常规方法免疫BALB/c小鼠,取小鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,通过ELISA方法筛选,获得一株能稳定分泌DP148R蛋白MAb的杂交瘤细胞株7D6.采用间接ELISA方法检测了该MAb的抗体效价,利用DP148R截短表达的各重组蛋白为抗原,采用western blot方法鉴定了该MAb识别的抗原表位,通过western blot和间接免疫荧光试验(IFA)鉴定了该MAb的反应原性.鉴定结果显示,纯化的MAb效价高于1:105,MAb 7D6为IgG2b亚型,该MAb识别的线性抗原表位为29LYWVFRAIHI38;分别采用western blot和IFA两种方法鉴定,结果均显示,纯化的MAb既能够特异性识别HEK293T细胞中表达的Flag-DP148R蛋白,也能够识别ASFV感染的PAMs细胞中表达的DP148R蛋白,反应原性较强.本研究制备的ASFV DP148R蛋白MAb可以为ASF诊断方法的建立以及DP148R蛋白的生物学功能研究提供参考依据.
文献关键词：
非洲猪瘟病毒;DP148R蛋白;原核表达;单克隆抗体
中图分类号：
作者姓名：
王永琦;郑君;翁长江
作者机构：
中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/基础免疫创新团队,黑龙江 哈尔滨 150069
文献出处：
引用格式：
[1]王永琦;郑君;翁长江-.非洲猪瘟病毒DP148R蛋白单克隆抗体的制备与鉴定)[J].中国预防兽医学报,2022(03):301-306
A类：
DP148R,7D6,29LYWVFRAIHI38
B类：
非洲猪瘟病毒,单克隆抗体的制备,ASFV,MAb,研究构建,原核表达,质粒,pET,28a,常规方法,BALB,脾细胞,SP2,骨髓瘤细胞,细胞融合,一株,杂交瘤细胞株,抗体效价,截短表达,重组蛋白,western,blot,抗原表位,间接免疫荧光试验,IFA,反应原性,价高,IgG2b,特异性识别,HEK293T,Flag,PAMs,生物学功能,功能研究
AB值：
0.233496
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