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非洲猪瘟病毒结构蛋白p54的优化表达及间接ELISA抗体检测方法的建立
文献摘要：
为了实现非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)p54基因在大肠杆菌中的高效表达,同时建立以ASFV-p54重组蛋白为抗原的间接ELISA抗体检测方法,本试验根据GenBank(序列号:NC_044943.1)公布的ASFV p54的基因序列,设计一对特异性引物,扩增构建pGEX-6P-1-p54原核表达质粒,在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中进行复制,经IPTG诱导表达,对重组蛋白利用SDS-PAGE分析和免疫印迹鉴定正确后,进行表达条件优化,并纯化重组蛋白.随后用ASFV-p54重组蛋白为包被抗原,通过条件优化、特异性试验、敏感性试验和重复性试验,建立一种稳定的血清ASFV抗体检测方法.结果显示,ASFV p54基因成功克隆到pGEX-6P-1原核表达载体中,得到pGEX-6P-1-p54原核表达质粒;转化E.coli菌株BL21(DE3)中,经诱导表达得到重组蛋白,大小为46 kDa;成功建立测定ASFV抗体的间接ELISA方法,优化后确定最佳包被浓度为1.2μg/mL,待检血清最佳稀释倍数1:100,最佳封闭液为1％BSA,酶标抗体最佳稀释度为1:4000,经验证此方法具有良好的特异性、灵敏度和重复性,可初步应用于ASFV抗体的检测.
文献关键词：
非洲猪瘟病毒;p54基因;重组蛋白;原核表达;间接ELISA
中图分类号：
作者姓名：
张皓淳
作者机构：
辽宁省农业发展服务中心,辽宁 沈阳 110034
文献出处：
引用格式：
[1]张皓淳-.非洲猪瘟病毒结构蛋白p54的优化表达及间接ELISA抗体检测方法的建立)[J].国外畜牧学-猪与禽,2022(02):35-42
A类：
B类：
非洲猪瘟病毒,结构蛋白,p54,抗体检测,African,swine,fever,virus,ASFV,大肠杆菌,高效表达,重组蛋白,GenBank,序列号,NC,基因序列,特异性引物,pGEX,6P,质粒,BL21,DE3,IPTG,诱导表达,SDS,PAGE,免疫印迹,表达条件优化,包被抗原,敏感性试验,重复性试验,原核表达载体,coli,kDa,倍数,封闭液,BSA,初步应用
AB值：
0.264394
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