为获得非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)体外诱导表达的MGF505-3R蛋白.实验依据GenBank中报道的MGF505-3R基因序列设计引物,引入His标签,以ASFV基因全序列为模板扩增目的基因.将目的基因克隆至原核表达载体pGEX-6p-1,并转入大肠杆菌Transetta(DE3)中.用1 mmol/L异丙基 β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达菌体,分别取上清液和沉淀进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺(SDS-PAGE)凝胶电泳分析.将表达的蛋白经过Ni-NTA琼脂糖亲和层析纯化.免疫印迹实验(Western-blot)分析蛋白的活性.克隆得到的MGF505-3R基因片段长度为843 bp,与原序列一致.蛋白在沉淀中以包涵体的形式表达,相对分子质量约为53 ku.纯化后可得到纯度较高的MGF505-3R重组蛋白.免疫印迹实验结果呈阳性.MGF505-3R蛋白可以在大肠杆菌Transetta(DE3)中表达并纯化,蛋白具有良好的表达活性.近几年,多基因家族(Multigene Families,MGFs)基因缺失疫苗被认为是目前ASF疫苗研制的主要方向,本研究获得的MGF505-3R重组蛋白将为ASFV MGF505-3R蛋白的研究提供基础,也为基因缺失疫苗相关免疫学方面的检测提供前期技术储备.

非洲猪瘟病毒;MGF505-3R蛋白;原核表达;蛋白纯化;免疫印迹实验

中国农业科学院长春兽医研究所,吉林长春 130122;吉林省农业科学院,吉林长春 130124

[1]王凤杰;魏天;张芳毓;王成宇;张守峰;扈荣良;吕礼良;王永志-.非洲猪瘟病毒MGF505-3R蛋白的原核表达研究)[J].吉林畜牧兽医,2022(01):1-2,5

Multigene,MGFs

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