典型文献
非洲猪瘟病毒A104R蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备与鉴定
文献摘要：
为制备非洲猪瘟病毒(ASFV)重组蛋白A104R(rA104R)及研制抗rA104R的多克隆抗体,本研究通过ExPASy等在线生物信息学软件初步预测该蛋白的理化性质、信号肽、核定位信号等信息,继而合成ASFV的A104R基因,构建基于pET-28a(+)载体的原核表达系统.重组蛋白用Ni亲和层析纯化后,经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、Western blotting和液相色谱-质谱联用(LC-MS)技术鉴定.纯化的蛋白免疫6-8周龄BALB/c小鼠,制备抗rA104R的多克隆抗体,通过West-ern blotting 和间接酶联免疫吸附试验(ELISA)鉴定其反应性和免疫原性.结果显示,原核表达载体构建成功;重组菌在37℃诱导8 h后表达量最高,在包涵体和上清中均有表达,表明其呈部分可溶性表达;纯化的重组蛋白大小约16 kDa,且反应性良好;LC-MS分析结果显示,该rA104R蛋白多个肽段均与目标蛋白的氨基酸序列相匹配,匹配率为59％;制备的鼠源抗rA104R多克隆抗体效价大于1∶2 048 000,具有良好的免疫原性.结果表明,本研究制备的rA104R及其多克隆抗体可进一步用于生物学功能研究,并可为疫苗及相关诊断试剂研制提供基础材料.
文献关键词：
非洲猪瘟病毒;原核表达;A104R重组蛋白;液相色谱-质谱
中图分类号：
作者姓名：
蒋亚君;王召阳;崔帅;王洋;鑫婷;郭晓宇;刘雪婷;陈世钰;房立春;朱鸿飞;贾红
作者机构：
中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,北京海淀100193;华南农业大学兽医学院,广东广州510630;山东省农业科学院,山东济南250100
文献出处：
引用格式：
[1]蒋亚君;王召阳;崔帅;王洋;鑫婷;郭晓宇;刘雪婷;陈世钰;房立春;朱鸿飞;贾红-.非洲猪瘟病毒A104R蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备与鉴定)[J].中国兽医杂志,2022(06):29-34
A类：
A104R,rA104R
B类：
非洲猪瘟病毒,多克隆抗体,ASFV,重组蛋白,ExPASy,生物信息学软件,信号肽,核定位信号,pET,28a,表达系统,白用,亲和层析,层析纯化,聚丙烯酰胺凝胶电泳,SDS,PAGE,blotting,LC,技术鉴定,周龄,BALB,间接酶联免疫吸附试验,反应性,免疫原性,原核表达载体,表达载体构建,包涵体,上清,可溶性表达,kDa,氨基酸序列,匹配率,抗体效价,生物学功能,功能研究,诊断试剂
AB值：
0.228888
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