艰难梭菌是一种重要的人兽共患肠道病原菌,广泛存在于人和多种动物体内.ST11型艰难梭菌是国际上流行最广泛、危害最大的亚型之一.我国作为养猪业大国,猪源艰难梭菌的检测方法欠缺,给猪场艰难梭菌的防控留下隐患.本研究旨在建立一种特异、敏感的双抗体夹心ELISA,为猪源ST11型艰难梭菌流行病学调查提供血清学检测方法.首先采用原核表达并纯化出97 kDa的受体结合域(receptor binding domain,RBD)蛋白,并利用杂交瘤技术成功筛选出能稳定分泌针对RBD蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞AE2D3,经检测其抗体亚型为IgG2b(κ).其次以针对RBD蛋白的单克隆抗体为检测抗体、兔多克隆抗体为捕获抗体,运用棋盘法确定了捕获抗体和检测抗体的配对浓度、抗原包被条件、封闭条件、检测抗体和待检样品的孵育条件、羊抗小鼠IgG/HRP和TMB显色液反应条件.经测定,此方法的临界值OD450为0.152,与13株非ST11型的艰难梭菌无交叉反应,对RBD蛋白的最低检测浓度为8.83 ng/mL.这一特异、敏感、可用于兽医临床检测猪源ST11型艰难梭菌的双抗体夹心ELISA,为养猪业ST11型艰难梭菌流行病学调查提供了可靠的血清学检测方法.

艰难梭菌;ST11型;RBD蛋白;单克隆抗体;双抗体夹心ELISA

四川农业大学动物医学院猪病研究中心,四川成都611130;四川农业大学国家级动物类实验教学示范中心,四川成都611130;农业部兽用药物与兽医诊断技术四川科学观测站,四川成都611130

[1]梁伟;全柯吉;赵勤;武耀民;穆瑜;曹三杰-.猪源ST11型艰难梭菌TcdB毒素受体结合域双抗体夹心ELISA的建立)[J].生物工程学报,2022(01):185-195

TcdB,AE2D3

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