典型文献
非洲猪瘟病毒无标签p30-ELISA抗体检测方法的建立及应用
文献摘要：
非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)引起猪的一种急性、热性、出血性、高度接触性传染病,临床症状以败血症、皮炎和关节炎为特征,高发病率和高死亡率.为建立临床检测ASFV抗体的间接ELISA检测方法,本研究扩增了 ASFV-CP204L基因,通过pET-30a原核表达系统表达p30蛋白,使用Ni-NTA纯化表达产物,通过肠激酶切除外源性蛋白,得到无His-组氨酸标签的p30蛋白,以此为诊断抗原,建立间接ELISA方法.结果显示:表达的无标签p30重组蛋白大小约为30 ku,与ASF阳性猪血清具有较好的反应原性;确定ELISA抗原包被浓度为1 μg·mL-1,根据ROC曲线下面积确定S/P值＞0.398判定为阳性,批内、批间变异系数均＜10％;与PCV2、CSFV、PRV-gE、PRRSV阳性血清无交叉反应与INGENASA商品化试剂盒总符合率为97.78％.用该方法分别检测标准阳性血清、动物感染试验血清和收集的区域性临床血清644份,该方法最低可检测到1 ∶ 512倍稀释的标准阳性血清样品;检测感染动物血清,其中80％(4/5)的试验动物在第10天抗体为阳性.644份临床猪血清样品中抗体阳性率为7.61％,其中,母猪、后备母猪、仔猪、保育猪和育肥猪抗体阳性率分别为3.03％、0％、4.94％、7.55％和28.7％.本试验建立的ASFV-p30间接ELISA方法具有良好的特异性、灵敏度和重复性,可应用于ASFV的抗体检测,为ASF的诊断和流行病学调查提供了技术手段.
文献关键词：
非洲猪瘟;CP204L基因;p30蛋白;原核表达;ELISA抗体检测
中图分类号：
作者姓名：
于学祥;陈晓雨;李栋凡;孙琪;库旭钢;范盛先;杨汉春;何启盖
作者机构：
华中农业大学动物医学院,武汉430070;农业微生物学国家重点实验室,武汉430070;生猪健康养殖协同创新中心,武汉430070;中国农业大学动物医学院,北京100193
文献出处：
引用格式：
[1]于学祥;陈晓雨;李栋凡;孙琪;库旭钢;范盛先;杨汉春;何启盖-.非洲猪瘟病毒无标签p30-ELISA抗体检测方法的建立及应用)[J].畜牧兽医学报,2022(05):1517-1526
A类：
CP204L,INGENASA
B类：
非洲猪瘟病毒,无标签,p30,抗体检测,建立及应用,African,swine,fever,virus,ASFV,出血性,接触性,败血症,皮炎,关节炎,临床检测,pET,30a,原核表达,表达系统,NTA,达产,肠激酶,除外,外源性,His,组氨酸,诊断抗原,重组蛋白,ku,猪血,反应原性,包被,PCV2,CSFV,PRV,gE,PRRSV,阳性血清,交叉反应,商品化,试剂盒,符合率,检测标准,物感,感染试验,验血,清样,动物血清,试验动物,抗体阳性率,后备母猪,仔猪,保育猪,育肥猪,流行病学调查
AB值：
0.347978
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