旨在建立检测非洲猪瘟病毒(ASFV)血清抗体的间接ELISA方法.本研究以两株纯化的ASFV p30与p54蛋白单克隆抗体(mAbs)为靶分子,利用噬菌体展示十二肽库进行四轮生物淘选,筛选多肽表位,以氨基酸GGG为接头设计合成表位串联多肽作为包被抗原,通过棋盘滴定法确定间接ELISA的最佳反应条件,利用不同类型血清样本对建立的方法进行特异性分析、敏感度分析、稳定性分析及符合性评价.噬菌体淘选试验结果表明146PAEPYTT152为本实验室保存的mAb所识别的p54蛋白抗原表位核心序列.ELISA条件优化试验结果显示,以鸡卵白蛋白(OVA)作为N端偶联物的表位串联多肽抗原具有较低的非特异性血清反应背景,当多肽以碳酸盐缓冲液包被(2μg·mL-1),血清以封闭液(1％明胶溶液)稀释100倍,辣根过氧化物酶(HRP)标记抗体以0.05％PBST溶液稀释5 000倍时,反应效果最佳;以上述优化后的条件确定了血清抗体阳性临界值为0.339.方法评价试验结果显示,该方法与经典猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪细小病毒(PPV)及猪伪狂犬病病毒(PRV)的抗体阳性血清均无交叉反应,能检测低至1 600倍稀释的ASFV阳性血清,具有较好的重复性.用该方法与商品化的ASFV抗体检测试剂盒同时检测320份猪血清样本,两种方法的相对特异性和相对敏感性分别为97.6％与97.3％,总体符合率达97.5％(312/320).综上表明,本研究建立的多肽间接ELISA方法具有良好的特异性、敏感性及重复性,具有发展为临床诊断试剂盒的潜在应用价值.

非洲猪瘟病毒;p30蛋白;p54蛋白;生物淘选;表位串联多肽;间接ELISA

马俊;王志远;梁杏玲;郑泽中;杨汉春;张桂红;王衡

华南农业大学兽医学院广东省临床重大疾病综合防控重点实验室,广州510642;国家非洲猪瘟区域实验室(广州),广州510642;中国农业大学动物医学院,北京100193;岭南现代农业科学与技术广东省实验室茂名分中心,茂名525000;华南农业大学非洲猪瘟防控技术研究中心与国家生猪种业工程技术研究中心,广州510642

畜牧兽医学报

[1]马俊;王志远;梁杏玲;郑泽中;杨汉春;张桂红;王衡-.基于非洲猪瘟病毒p30与p54蛋白表位串联多肽的间接ELISA抗体检测方法的建立)[J].畜牧兽医学报,2022(12):4325-4336

表位串联多肽,生物淘选,GGG,146PAEPYTT152

非洲猪瘟病毒,p30,p54,抗体检测,ASFV,血清抗体,两株,单克隆抗体,mAbs,噬菌体展示,二肽,四轮,接头设计,设计合成,合成表位,包被抗原,棋盘,滴定法,反应条件,血清样本,敏感度分析,稳定性分析,符合性,抗原表位,核心序列,条件优化,优化试验,卵白蛋白,OVA,偶联物,非特异性,特异性血清,碳酸盐,缓冲液,封闭液,明胶,胶溶,辣根过氧化物酶,HRP,PBST,体阳,方法评价,经典猪瘟,CSFV,猪繁殖与呼吸综合征病毒,PRRSV,猪圆环病毒,PCV2,猪细小病毒,PPV,猪伪狂犬病病毒,PRV,阳性血清,交叉反应,商品化,检测试剂盒,同时检测,猪血,符合率,诊断试剂,潜在应用

0.306702