典型文献
基于单个B细胞抗体基因扩增技术筛选马IgG1单克隆抗体
文献摘要：
在马的免疫学研究领域中,由于目前市场上缺乏商业化的马IgG单克隆抗体,使得对马的B细胞研究受到很大阻碍,IgG是B细胞受体(BCR)的重要构成成分,与B细胞分化成熟相关.为了获得马IgG特异性单克隆抗体,利用单个B细胞扩增技术进行抗体筛选.首先,将马IgG蛋白(EqIgG1-C)密码子优化后合成到真核表达载体pcDNA3.4上,纯化出抗原蛋白.随后,使用蛋白质免疫小鼠,分离脾细胞后利用流式细胞术分离特异性单个B细胞,扩增出抗体重链和轻链的可变区基因,用overlapping PCR方法扩增出线性化的完整抗体,并进行鉴定.结果从80个B细胞中获得了 27株特异性重组单克隆抗体,并挑选出3株线性结合活性最强的抗体基因构建到表达载体上,共转染Expi293FTM细胞后表达纯化,经过ELISA和Western blot验证,显示获得的抗体可以和EqIgG1-C蛋白有良好的结合作用.使用该方法可以省时高效的获得特异性抗体,为马的免疫学研究提供了重要研究工具,为鼠单克隆抗体筛选提供了技术拓展.
文献关键词：
马IgG;单个B细胞PCR;抗体筛选技术;单克隆抗体
中图分类号：
作者姓名：
陈阳;刘彤;张佳琦;廖化新;林跃智;王晓钧;王亚玉
作者机构：
暨南大学生命科学技术学院 广州 5106321;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 兽医生物技术国家重点实验室/马传染病和慢病毒病研究创新团队 哈尔滨 150069
文献出处：
引用格式：
[1]陈阳;刘彤;张佳琦;廖化新;林跃智;王晓钧;王亚玉-.基于单个B细胞抗体基因扩增技术筛选马IgG1单克隆抗体)[J].中国生物工程杂志,2022(04):17-23
A类：
EqIgG1,Expi293FTM,抗体筛选技术
B类：
基因扩增,技术筛选,单克隆抗体,免疫学,细胞受体,BCR,细胞分化,分化成,细胞扩增,密码子优化,后合成,真核表达载体,pcDNA3,抗原蛋白,脾细胞,流式细胞术,轻链,可变区,overlapping,出线,线性化,挑选出,结合活性,共转染,表达纯化,blot,省时,特异性抗体,研究工具
AB值：
0.276464
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