典型文献
A型塞内卡病毒VP1蛋白单克隆抗体制备及胶体金试纸条的试制
文献摘要：
A型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)是近年新发现的一种病原体,严重危害着我国养猪业的健康发展.为制备SVA病毒结构蛋白1(viral structural protein 1,VP1)单克隆抗体(monoclonol aitibody,McAbs)及建立一种快速、高效、简便的SVA检测方法,本研究利用RT-PCR方法扩增SVA VP1基因,将其克隆到表达载体pET-28a(+)中,诱导表达并纯化得到重组VP1蛋白.以重组VP1蛋白免疫BALB/c小鼠(Mus musculus),筛选获得2株稳定分泌抗SVA VP1蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株(2E10,3E4).通过2E10和3E4免疫小鼠获得腹水型McAbs并纯化,利用间接免疫荧光实验(indirect immunofluorescence assay,IFA)和Western blot鉴定McAbs.以2E10 McAbs作为捕捉抗体,山羊抗鼠IgG与3E4 McAbs分别作为质控线(C线)与检测线(T线)试制SVA胶体金试纸条.结果显示,重组SVA VP1蛋白主要以包涵体形式表达,分子质量约为43 kD.抗体亚型鉴定结果显示,2E10重链亚型为IgG2b,3E4重链亚型为IgG2a,轻链均为κ链.IFA和Western blot结果显示,制备的McAbs与SVA特异性结合.试纸条检测结果显示,试纸条能特异性地检测SVA,而与口蹄疫病毒(Foot and mouth disease virus,FMDV)、猪繁殖障碍与呼吸症病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)、猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)和猪圆环病毒2型病毒(Porcine cirovirus type 2,PCV2)无交叉反应;最低检测病毒含量为5×101.13 TCID50/mL;该方法与qPCR方法检测临床样品的符合率达96.55％.以上结果表明,本研究制备的基于VP1单克隆抗体的胶体金试纸条为SVA的即时检测提供了新方法.
文献关键词：
A型塞内卡病毒(SVA);病毒结构蛋白1(VP1);单克隆抗体;胶体金试纸条
中图分类号：
作者姓名：
张涛;王会宝;孙燕燕;翟国元;崔燕
作者机构：
甘肃农业大学动物医学院,兰州730070;中农威特生物科技股份有限公司,兰州730046;兰州兽研生物科技有限公司,兰州730046
文献出处：
引用格式：
[1]张涛;王会宝;孙燕燕;翟国元;崔燕-.A型塞内卡病毒VP1蛋白单克隆抗体制备及胶体金试纸条的试制)[J].农业生物技术学报,2022(11):2255-2266
A类：
monoclonol,aitibody,McAbs,2E10,3E4,cirovirus
B类：
塞内卡病毒,VP1,单克隆抗体,抗体制备,胶体金试纸条,试制,Senecavirus,SVA,新发现,病原体,严重危害,养猪业,结构蛋白,viral,structural,protein,研究利用,表达载体,pET,28a,诱导表达,BALB,Mus,musculus,杂交瘤细胞株,腹水,水型,间接免疫荧光,indirect,immunofluorescence,assay,IFA,blot,山羊,质控,检测线,包涵体,分子质量,kD,抗体亚型,IgG2b,IgG2a,轻链,特异性结合,口蹄疫病毒,Foot,mouth,disease,FMDV,猪繁殖,繁殖障碍,Porcine,reproductive,respiratory,syndrome,PRRSV,猪瘟病毒,Classical,swine,fever,CSFV,猪圆环病毒,type,PCV2,交叉反应,病毒含量,TCID50,qPCR,符合率,即时检测
AB值：
0.312496
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