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带Flag标签的RNF26真核表达载体构建及功能验证
文献摘要：
目的 构建带Flag标签的RING结构泛素连接酶26(Ring finger protein 26,RNF26)真核表达载体,表达Flag-RNF26的融合蛋白,通过细胞免疫荧光实验,观察其在人肝癌细胞HepG2中的定位及与带绿色荧光蛋白标签的死骨片1(sequestosome 1,SQSTM1)是否存在共定位.方法 以人乳腺文库为模板,应用PCR技术扩增出RNF26的编码区序列,双酶切后插入带Flag标签的pCMV-Tag2B载体中,构建pCMV-Tag2B-RNF26重组质粒;将测序正确的重组质粒和pCMV-Tag2B空载体分别转染人胚肾293T细胞中,Western印迹检测融合蛋白表达情况,将成功表达的质粒pCMV-Tag2B-RNF26与pEGFP-SQSTM1质粒转染至人肝癌细胞HepG2中,进行免疫荧光染色,荧光显微镜观察SQSTM1和RNF26的共定位情况.结果 插入片段的DNA序列测序结果与目的基因序列相同,Western印迹检测提示,融合蛋白成功表达;免疫荧光结果表明,RNF26与SQSTM1蛋白在细胞质中存在共定位.结论 pCMV-Tag2B-RNF26真核表达载体构建成功.带Flag标签的人RNF26蛋白在HepG2细胞内成功表达,且与SQSTM1蛋白存在共定位,为进一步研究RNF26和SQSTM1的相互作用关系建立了实验基础.
文献关键词：
RNF26;死骨片蛋白1;真核表达;HepG2细胞;荧光免疫测定;克隆
中图分类号：
作者姓名：
贾松浩;丛瑞;朱祥;霍楠;马路园;唐枝;孙志佳;亢小峰;初众;徐小洁;李荣宽
作者机构：
大连医科大学附属第二医院,辽宁大连 116027;军事科学院军事医学研究院生物工程研究所,北京 100850
文献出处：
引用格式：
[1]贾松浩;丛瑞;朱祥;霍楠;马路园;唐枝;孙志佳;亢小峰;初众;徐小洁;李荣宽-.带Flag标签的RNF26真核表达载体构建及功能验证)[J].军事医学,2022(03):184-187
A类：
RNF26,Tag2B
B类：
Flag,真核表达载体,表达载体构建,功能验证,RING,泛素连接酶,Ring,finger,protein,过细,细胞免疫,人肝癌细胞,HepG2,绿色荧光蛋白,sequestosome,SQSTM1,共定位,人乳,文库,编码区,双酶,pCMV,重组质粒,空载,人胚,胚肾,293T,融合蛋白表达,pEGFP,质粒转染,免疫荧光染色,荧光显微镜观察,目的基因,基因序列,细胞质,相互作用关系,荧光免疫测定
AB值：
0.248092
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