典型文献
大鼠miR-133a-3p慢病毒载体的构建及稳转株建立
文献摘要：
目的 构建大鼠micro RNA-133a-3P(miR-133a-3p)过表达及干扰慢病毒载体,筛选建立稳定表达miR-133a-3p的阴茎海绵体平滑肌细胞(CCSMC)稳转细胞株.方法 原代及传代培养CCSMCs,并进行细胞免疫荧光染色鉴定.PCR技术扩增相应目的基因片段并进行酶切,回收后与目的基因连接,产物转化细菌感受态细胞,对阳性克隆测序行对比分析后,使用三质粒包装系统将含有目的基因的重组质粒和辅助包装质粒共转染至293T细胞进行慢病毒包装及纯化,并用荧光法测定病毒滴度.设置miR-133a-3p过表达组、miR-133a-3p干扰组、阴性对照组和空白对照组,在感染复数为10的条件下感染CCSMCs.倒置荧光显微镜下观察各组绿色荧光蛋白的表达情况,浓度为2μg·mL-1嘌呤霉素筛选出稳定表达miR-133a-3p的CCSMCs.qRT-PCR检测慢病毒转染后CCSMCs内miR-133a-3p的表达.结果 原代培养的大鼠CCSMCsα-SMA阳性细胞率达90％以上.经测序分析证实重组慢病毒构建正确;过表达及干扰慢病毒滴度分别为3×108和1×109 TU·mL-1;qRT-PCR结果显示,与阴性对照组相比,miR-133a-3p过表达组miR-133a-3p的相对表达量增高,miR-133a-3p干扰组miR-133a-3p的相对表达量降低(P均<0.01).结论 本实验成功构建了miR-133a-3p过表达及干扰慢病毒表达载体,对大鼠CCSMCs进行转染和筛选后,可快速、高效、低成本获得过表达及干扰miR-133a-3p的稳转株.
文献关键词：
micro RNA-133a-3p;CCSMCs;慢病毒感染
中图分类号：
作者姓名：
张志蕊;陈耀平
作者机构：
宁夏医科大学,银川 750004;宁夏医科大学总医院,银川 750004
文献出处：
引用格式：
[1]张志蕊;陈耀平-.大鼠miR-133a-3p慢病毒载体的构建及稳转株建立)[J].宁夏医科大学学报,2022(06):567-572,579
A类：
阴茎海绵体平滑肌细胞,CCSMC,CCSMCs
B类：
miR,133a,3p,慢病毒载体,micro,3P,过表达,稳定表达,稳转细胞株,传代培养,细胞免疫,免疫荧光染色,目的基因,感受态,克隆测序,包装系统,重组质粒,共转染,293T,慢病毒包装,荧光法,病毒滴度,空白对照,复数,倒置,荧光显微镜,显微镜下,绿色荧光蛋白,嘌呤霉素,qRT,慢病毒转染,原代培养,SMA,阳性细胞,测序分析,重组慢病毒,TU,相对表达量,慢病毒表达载体,慢病毒感染
AB值：
0.21467
相似文献
机标中图分类号，由域田数据科技根据网络公开资料自动分析生成，仅供学习研究参考。
