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LAG3慢病毒质粒构建及其稳定转染细胞系的建立
文献摘要：
目的:构建淋巴细胞活化因子3(LAG3)-mCherry红色荧光蛋白的LAG3-mCherry慢病毒表达载体,转染HEK293T细胞获得稳定表达LAG3-mCherry融合蛋白的细胞系,探讨LAG3-mCherry融合蛋白在HEK293T细胞中的定位.方法:将LAG3质粒和带有mCherry的慢病毒载体分别用限制性内切酶EcoRⅠ和NotⅠ进行双酶切,构建pEZ-LAG3-mCherry表达载体.将测序正确的质粒利用Lipofectamine 3000转染HEK293T细胞,利用荧光显微镜观察LAG3-mCherry在HEK293T细胞中的表达定位,Western blotting法检测LAG3-mCherry融合蛋白的表达情况.结果:酶切鉴定结果,电泳后重组质粒双酶切后可见约为8012和2066 bp大小的2条DNA条带,与pEZ-Lv-mCherry载体及LAG3基因片段大小相符;DNA测序结果,LAG3基因成功插入到慢病毒表达载体中.荧光显微镜观察,LAG3-mCherry融合蛋白主要在HEK293T细胞膜上表达,少量蛋白滞留在细胞质中.Western blotting法检测,在转染pEZ-LAG3-mCherry质粒中检测到LAG3对应特异性条带.结论:成功构建了LAG3-mCherry慢病毒表达载体pEZ-LAG3-mCherry.通过稳定转染成功制备了稳定表达LAG3-mCherry的细胞系.LAG3-mCherry融合蛋白主要分布于HEK293T细胞的细胞膜上.
文献关键词：
淋巴细胞活化因子3;慢病毒表达载体;红色荧光蛋白;细胞转染
中图分类号：
作者姓名：
刘宇轩;黄莉莉;杨馥旭;方楷漪;胡楠楠;穆业腾;郭冲;夏薇;关新刚
作者机构：
北华大学医学技术学院医药生物工程重点实验室,吉林 吉林 132013
文献出处：
引用格式：
[1]刘宇轩;黄莉莉;杨馥旭;方楷漪;胡楠楠;穆业腾;郭冲;夏薇;关新刚-.LAG3慢病毒质粒构建及其稳定转染细胞系的建立)[J].吉林大学学报（医学版）,2022(01):136-141
A类：
pEZ
B类：
LAG3,病毒质,质粒构建,稳定转染,细胞系,淋巴细胞活化,活化因子,mCherry,红色荧光蛋白,慢病毒表达载体,HEK293T,稳定表达,融合蛋白,慢病毒载体,限制性内切酶,EcoR,Not,双酶,Lipofectamine,荧光显微镜观察,表达定位,blotting,电泳,重组质粒,bp,条带,Lv,细胞膜,滞留,细胞质,染成,细胞转染
AB值：
0.190025
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