典型文献
人GFP-Sp1基因真核表达载体的构建及其对细胞周期调控作用研究
文献摘要：
背景 乳腺癌目前已经成为女性发病率最高的恶性肿瘤,因此寻找有效治疗靶点进而控制肿瘤发生发展至关重要.目的 构建带绿色荧光蛋白报告载体pEGFP-C1的Sp1真核表达载体,在获得pEGFP-Sp1融合表达蛋白后,对其功能进行验证.方法 以人乳腺文库为模版,采用PCR技术扩增出Sp1的CDS区编码序列技术,将其插入到pEGFP-C1载体中,经酶切和测序验证成功后,转染至人胚肾293T细胞,蛋白质印迹法检测该融合蛋白的表达情况;分别转染pEGFP-C1、pEGFP-Sp1到人乳腺癌细胞ZR75-1细胞中,通过荧光显微镜观察Sp1蛋白在细胞中定位情况,通过逆转录PCR检测细胞周期基因转录水平.结果 经双酶切及测序鉴定证明pEGFP-Sp1质粒构建成功,蛋白印迹检测蛋白表达成功;荧光显微镜结果显示Sp1主要定位于人乳腺癌细胞ZR75-1细胞的细胞核中,逆转录PCR结果显示过表达Sp1可改变细胞周期相关基因转录水平.结论 通过构建真核表达载体pEGFP-Sp1,可确定Sp1蛋白在人乳腺癌细胞ZR75-1细胞中表达,且主要表达于细胞核中.同时Sp1可下调Cyclin D2与CDK6 mRNA水平,上调Cyclin G2和p18 mRNA水平.综上所述,我们的结果表明Sp1在细胞周期通路中发挥重要的功能,这为进一步深入研究Sp1转录因子的功能提供基础.
文献关键词：
ZR75-1;转录因子Sp1;pEGFP-Sp1;聚合酶链式反应;细胞周期
中图分类号：
作者姓名：
崔瀛书;孙园园;龙珊;徐媛媛;李怡;胡佳;李倩;李晓松
作者机构：
解放军医学院,北京 100853;解放军总医院第七医学中心 肿瘤内科,北京 100700;解放军总医院第一医学中心 激光科,北京 100853
文献出处：
引用格式：
[1]崔瀛书;孙园园;龙珊;徐媛媛;李怡;胡佳;李倩;李晓松-.人GFP-Sp1基因真核表达载体的构建及其对细胞周期调控作用研究)[J].解放军医学院学报,2022(08):867-872
A类：
ZR75
B类：
Sp1,真核表达载体,周期调控,治疗靶点,肿瘤发生发展,绿色荧光蛋白,pEGFP,C1,融合表达,文库,模版,CDS,编码序列,证成,转染,人胚,胚肾,293T,蛋白质印迹法,融合蛋白,人乳腺癌细胞,荧光显微镜观察,逆转录,基因转录水平,双酶,质粒构建,蛋白印迹,细胞核,过表达,可改变,变细,可下,Cyclin,D2,CDK6,G2,p18,综上所述,细胞周期通路,聚合酶链式反应
AB值：
0.243955
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