典型文献
免疫检查点TIGIT慢病毒表达载体的构建和稳定表达TIGIT细胞系的建立
文献摘要：
目的:构建T细胞免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸抑制基序结构域-绿色荧光蛋白(TIGIT-GFP)慢病毒表达载体,建立稳定表达TIGIT-GFP的细胞系,探讨TIGIT-GFP融合蛋白在稳定表达细胞系中的表达情况.方法:将TIGIT质粒和慢病毒载体pLenti-GFP分别采用限制性内切酶EcoRⅠ和NotⅠ双酶切,凝胶回收后连接构建重组质粒pLenti-TIGIT-GFP.将测序正确的重组质粒转染人胚胎肾HEK293T细胞作为实验组,转染TIGIT质粒的HEK293T细胞作为对照组,转染48 h后荧光显微镜下观察细胞膜上GFP表达情况.将实验组细胞继续培养,采用嘌呤霉素筛选2周后,挑取单克隆扩大培养,荧光显微镜观察细胞膜上GFP表达情况,Western blotting法检测在转染的人胚胎肾HEK293T细胞中TIGIT-GFP蛋白表达情况.结果:酶切鉴定,TIGIT基因成功插入pLenti-GFP表达载体,DNA测序未检测到突变发生.实验组细胞膜上检测到GFP表达.Western blotting法检测,实验组细胞裂解液中检测到TIGIT-GFP特异性条带.结论:成功构建pLenti-TIGIT-GFP慢病毒表达载体,建立稳定表达TIGIT-GFP融合蛋白的细胞系,TIGIT-GFP融合蛋白主要在稳定细胞系的细胞膜上表达.
文献关键词：
T细胞免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸抑制基序结构域;绿色荧光蛋白;慢病毒表达载体;稳定转染;单克隆细胞
中图分类号：
作者姓名：
穆业腾;郭冲;胡楠楠;杨馥旭;薛晗;范宇鑫;郭峰霖;关新刚
作者机构：
北华大学医学技术学院医药生物工程重点实验室,吉林 吉林132013;台州学院医学院基础医学系,浙江 台州 318000
文献出处：
引用格式：
[1]穆业腾;郭冲;胡楠楠;杨馥旭;薛晗;范宇鑫;郭峰霖;关新刚-.免疫检查点TIGIT慢病毒表达载体的构建和稳定表达TIGIT细胞系的建立)[J].吉林大学学报（医学版）,2022(05):1341-1347
A类：
B类：
免疫检查点,TIGIT,慢病毒表达载体,细胞免疫,免疫球蛋白,酪氨酸,酸抑制,基序,序结构,结构域,绿色荧光蛋白,GFP,融合蛋白,稳定表达细胞系,慢病毒载体,pLenti,限制性内切酶,EcoR,Not,双酶,重组质粒,质粒转染,人胚胎,HEK293T,显微镜下,细胞膜,嘌呤霉素,扩大培养,荧光显微镜观察,blotting,未检,条带,稳定细胞系,稳定转染,单克隆细胞
AB值：
0.206483
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