典型文献
过表达HGF基因AAV9型腺相关病毒载体的构建与鉴定
文献摘要：
目的 构建稳定表达肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)基因重组腺相关病毒过表达质粒载体,制备并纯化HGF过表达的高滴度重组腺相关病毒.方法 合成HGF基因并利用PCR扩增,退火形成双链,与pAAV-ITR-CMV质粒经XhoI单酶切连接构建质粒pAAV-ITR-CMV-AAV9-HGF,转化至大肠杆菌DH5α,提质粒后经酶切和测序鉴定证实重组质粒克隆正确,将重组质粒转染至293FT细胞中包装为腺相关病毒.小鼠注射病毒后通过Western blot法评价HGF的蛋白表达水平.结果 扩增产物包含HGF CDS全序列的2186 bp,酶切结果与测序结果说明PCR扩增HGF目的片段成功;实时荧光定量PCR检测结果显示,纯化后所得的过表达HGF的腺相关病毒滴度为5.22×1012 vg·mL-1;HGF过表达组HGF蛋白相对表达含量较生理盐水组与阴性对照组均升高(P均<0.01).结论 本研究成功构建了HGF腺相关病毒载体且病毒滴度达到普通动物注射要求,证明腺相关病毒载体构建成功.
文献关键词：
肝细胞生长因子;腺相关病毒;AAV9
中图分类号：
作者姓名：
王秋实;孙岳;刘太阳;宝瑞;郝玮;刘耀阳;李媛媛;畅思容;王梦;刘志宏
作者机构：
宁夏医科大学公共卫生与管理学院,银川 750004;国家卫生健康委员会代谢性心血管疾病研究重点实验室,银川 750004
文献出处：
引用格式：
[1]王秋实;孙岳;刘太阳;宝瑞;郝玮;刘耀阳;李媛媛;畅思容;王梦;刘志宏-.过表达HGF基因AAV9型腺相关病毒载体的构建与鉴定)[J].宁夏医科大学学报,2022(04):332-336,342
A类：
XhoI
B类：
HGF,AAV9,腺相关病毒载体,稳定表达,肝细胞生长因子,hepatocyte,growth,基因重组,重组腺相关病毒,过表达质粒,退火,成双,双链,pAAV,ITR,CMV,粒经,大肠杆菌,DH5,重组质粒,质粒转染,293FT,装为,blot,蛋白表达水平,扩增产物,CDS,全序,bp,切结,病毒滴度,vg,白相,相对表达,生理盐水,载体构建
AB值：
0.310143
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