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原子力显微镜观察细胞膜水通道AQP-3分布
文献摘要：
目的 构建水通道3(AQP-3)/血凝素(HA)融合标签载体,使用原子力显微镜(AFM)观察AQP-3在细胞膜的分布.方法 采用重叠聚合酶链反应(PCR)法将AQP-3/HA标签基因克隆到AQP-3的DNA序列中,构建真核表达载体,挑取单克隆菌落PCR初步鉴定后进行测序鉴定;质粒转染细胞后,采用免疫荧光标记HA标签蛋白,激光共聚焦显微镜下观察荧光标记并拍照;胶体金标记转染成功的细胞上HA标签,AFM观察胶体金颗粒从而分析AQP-3蛋白分布.结果 将HA标签蛋白插入AQP-3第二个胞外段,即T149-Y150之间,成功构建了融合表达载体pIRES2-AQP3/HA-EGF;共聚焦显微镜观察到转染成功的细胞发绿色荧光,AQP-3/HA融合蛋白呈蓝色荧光,其主要分布于细胞膜;AFM观察到细胞表面凹凸不平并伸出片状伪足和丝状伪足,AQP-3/HA在细胞膜表面分布有差异性,其在突起部位分布较多.结论 将HA标签插入AQP-3第二个胞外段,可减小对其功能影响,联合胶体金和AFM识别HA标签蛋白,能够实现AQP-3在细胞膜的示踪标记.
文献关键词：
原子力显微镜;水通道;细胞突起;胶体金
中图分类号：
作者姓名：
樊珍;王丽芳;王立伟;陈丽新;张海峰
作者机构：
西安市精神卫生中心心理科, 陕西 西安710061;西安交通大学转化医学研究院遗传与发育研究所, 陕西 西安712000;西安循证医药研究院, 陕西 西安710003;暨南大学基础医学院生理学系, 广东 广州510632
文献出处：
引用格式：
[1]樊珍;王丽芳;王立伟;陈丽新;张海峰-.原子力显微镜观察细胞膜水通道AQP-3分布)[J].空军军医大学学报,2022(06):720-724
A类：
T149,Y150
B类：
原子力显微镜,细胞膜,水通道,建水,血凝素,HA,融合标签,AFM,聚合酶链反应,基因克隆,真核表达载体,单克隆,菌落,质粒转染,免疫荧光标记,标签蛋白,激光共聚焦显微镜,显微镜下,拍照,胶体金,金标记,染成,外段,融合表达,pIRES2,AQP3,EGF,发绿,融合蛋白,蓝色,细胞表面,凹凸不平,伸出,丝状伪足,部位分布,功能影响,金和,示踪,细胞突起
AB值：
0.279946
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