目的 构建表达结核分枝杆菌多阶段抗原融合蛋白Ag85B-ESAT6(AE)和Rv2031c-Rv2626c(R2)的重组腺病毒,为其用于结核病新型疫苗的研究奠定基础.方法 体外合成人延长因子1α(EF1α)启动子DNA序列,将其亚克隆至腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV中,构建含有CMV、EF1α双启动子的腺病毒穿梭载体.PCR扩增课题组前期构建的AE、R2融合蛋白基因,并依次亚克隆至上述腺病毒穿梭载体的CMV和EF1启动子下游,阳性重组穿梭质粒命名为pAd-AE-R2.将pAd-AE-R2与骨架质粒共转染HEK293细胞,包装获得重组腺病毒,命名为Ad-AE-R2.RT-PCR法和间接免疫荧光法(IFA)对重组腺病毒表达的AE、R2融合蛋白的基因和蛋白表达水平进行鉴定.结果 Ad-AE-R2瞬时转染的HEK293细胞中可转录表达AE、R2融合蛋白基因.IFA法采用Ag85B、ESAT-6、Rv2626c和Rv2031c 4种抗原的单克隆抗体可分别检测到Ad-AE-R2感染的巨噬细胞中具有特异性的绿色荧光,表明Ad-AE-R2能够在宿主细胞内表达AE、R2融合蛋白.结论 成功构建并包装获得表达结核分枝杆菌多阶段抗原融合蛋白AE、R2的重组腺病毒,为其用于结核病新型疫苗研究奠定基础.

结核分枝杆菌;多阶段抗原;Ag85B;ESAT-6;Rv2031c;Rv2626c;重组腺病毒

王丽梅;姜泓;康健;靳芊芊

陕西省西安市空军军医大学基础医学院微生物与病原生物学教研室,西安710032;传染病诊疗中心,空军医科大学附属第二医院,西安710038

中国人兽共患病学报

[1]王丽梅;姜泓;康健;靳芊芊-.结核分枝杆菌抗原融合蛋白Ag85B-ESAT6和Rv2031c-Rv2626c重组腺病毒的构建及鉴定)[J].中国人兽共患病学报,2022(03):191-195

Rv2031c,Rv2626c,多阶段抗原,双启动

结核分枝杆菌,融合蛋白,Ag85B,ESAT6,重组腺病毒,建表,AE,结核病,新型疫苗,EF1,启动子,亚克,穿梭,pAdTrack,CMV,质粒,共转染,HEK293,间接免疫荧光法,IFA,蛋白表达水平,转录表达,单克隆抗体,巨噬细胞,宿主,主细胞,疫苗研究

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