典型文献
肿瘤归巢肽-近红外荧光蛋白融合蛋白的制备及其荧光特性
文献摘要：
目的:构建肿瘤归巢肽(THPs)-近红外荧光蛋白(NIRFP)miRFP670-LyP1融合蛋白的原核表达载体,纯化融合蛋白,研究融合蛋白的近红外荧光特性.方法:采用限制性核酸内切酶EcoRⅠ和NotⅠ对pmiRFP670-N1质粒和pET-28a质粒进行双酶切,构建pET-miRFP670原核表达载体,通过点突变引入LyP-1的DNA序列,构建重组表达载体pET-miRFP670-LyP1;将测序正确的重组表达载体转化至大肠杆菌BL21细胞中,SDS-PAGE电泳法检测不同温度(16℃和37℃)、不同异丙基硫代半乳糖苷浓度(0.1、0.5和1.0 mmol·L-1)诱导下融合蛋白原核表达量;采用Ni-NTA树脂亲和纯化融合蛋白,检测miRFP670-LyP1蛋白原核表达量;采用荧光显微镜观察乳腺癌4T1细胞中miRFP670-LyP1融合蛋白的细胞内吞形态表现.结果:检测到长度约为5343和973 bp的DNA条带,与pET-28a载体及miRFP670基因片段大小相符.DNA测序,LyP1序列成功插入至pET-miRFP670表达载体中.在16℃时miRFP670-LyP1融合蛋白的可溶性蛋白表达量较37℃时更高.采用Ni-NTA树脂纯化得到了高纯度的miRFP670-LyP1融合蛋白.荧光成像,miRFP670-LyP1融合蛋白可被乳腺癌4T1细胞高效内吞.结论:成功构建了pET-miRFP670-LyP1原核表达载体,融合蛋白在低温(16℃)较常温(37℃)诱导的可溶性蛋白表达量更高,亲和层析得到了高纯度的融合蛋白,融合蛋白被乳腺癌4T1细胞高效内吞并显示出近红外荧光.
文献关键词：
近红外荧光蛋白;肿瘤归巢肽;融合蛋白;原核表达;细胞内吞
中图分类号：
作者姓名：
杨馥旭;胡楠楠;郭冲;穆业腾;薛晗;范宇鑫;郭峰霖;关新刚
作者机构：
北华大学医学技术学院医药生物工程重点实验室,吉林 吉林132013;台州学院医学院基础医学系,浙江 台州 318000
文献出处：
引用格式：
[1]杨馥旭;胡楠楠;郭冲;穆业腾;薛晗;范宇鑫;郭峰霖;关新刚-.肿瘤归巢肽-近红外荧光蛋白融合蛋白的制备及其荧光特性)[J].吉林大学学报（医学版）,2022(06):1455-1461
A类：
肿瘤归巢肽,近红外荧光蛋白,THPs,NIRFP,miRFP670,LyP1,pmiRFP670,LyP
B类：
融合蛋白,荧光特性,原核表达载体,限制性,核酸内切酶,EcoR,Not,N1,质粒,pET,28a,双酶,点突变,重组表达,大肠杆菌,BL21,SDS,PAGE,电泳,异丙基,半乳糖,糖苷,蛋白原,NTA,亲和纯化,荧光显微镜观察,4T1,细胞内吞,bp,条带,列成,可溶性蛋白,树脂纯化,高纯度,荧光成像,亲和层析,吞并
AB值：
0.162646
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