典型文献
利用慢病毒包装小窝蛋白-1过表达稳定细胞株的构建
文献摘要：
目的 利用慢病毒包装构建过表达小窝蛋白-1(Caveolin-1)的稳定细胞株.方法 PCR扩增仓鼠肾细胞BHK-21中Caveolin-1基因,克隆至pTRIP-CMV载体中,构建重组表达质粒pTRIP-Cav1,将其与对照质粒pTRIP-EGFP分别经Lipofectamine? 2000介导转染HEK-293T细胞,收集包装的慢病毒并转导至BHK-21细胞,构建过表达Caveolin-1的细胞株BHK-Cav1及过表达绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)的对照细胞株BHK-EGFP.Western blot、qRT-PCR、免疫荧光法验证细胞株的稳定性及过表达特性,同时检测细胞活力.结果 经双酶切及测序鉴定,重组表达质粒pTRIP-Cav1构建正确.与BHK-21细胞比较,各代次BHK-EGFP细胞中EGFP荧光明显,BHK-Cav1细胞中Caveolin-1蛋白表达水平增加,mRNA水平显著增加(P＜0.01),且表达水平不随细胞代次的增长而改变.BHK-Cav1和BHK-EGFP细胞活力与BHK-21细胞比较,差异均无统计学意义(P均＞0.05).结论 成功构建了Caveolin-1过表达细胞株BHK-Cav1,其具有较好的稳定性,为下一步研究病毒通过Caveolin依赖型内吞途径感染BHK-21细胞奠定了基础.
文献关键词：
小窝蛋白-1;慢病毒;仓鼠肾细胞BHK-21;细胞株;稳定性
中图分类号：
作者姓名：
刘杨;许淑娟;李琼毅;刘翊忠
作者机构：
西北民族大学生物医学研究中心生物工程与技术国家民委重点实验室,甘肃兰州730030;西北民族大学生命科学与工程学院,甘肃兰州730030
文献出处：
引用格式：
[1]刘杨;许淑娟;李琼毅;刘翊忠-.利用慢病毒包装小窝蛋白-1过表达稳定细胞株的构建)[J].中国生物制品学杂志,2022(02):164-169
A类：
pTRIP
B类：
慢病毒包装,小窝,过表达,稳定细胞株,Caveolin,仓鼠,肾细胞,BHK,CMV,重组表达,质粒,Cav1,EGFP,Lipofectamine,转染,HEK,293T,转导,绿色荧光蛋白,enhanced,green,fluorescent,protein,blot,qRT,免疫荧光法,表达特性,同时检测,细胞活力,双酶,光明,蛋白表达水平,依赖型,内吞
AB值：
0.250867
相似文献
机标中图分类号，由域田数据科技根据网络公开资料自动分析生成，仅供学习研究参考。
