典型文献
棉铃虫效应蛋白HARP1体外表达与纯化体系的建立
文献摘要：
[目的]本文旨在通过建立棉铃虫效应蛋白HARP1体外表达纯化体系,对HARP1蛋白进行体外表达和纯化,为解析HARP1蛋白与植物茉莉酸信号途径中JAZ蛋白的互作分子机制奠定基础.[方法]对harp1基因序列进行密码子优化,使用蛋白预测软件预测HARP1中的信号肽和成熟肽.基于以上信息构建目的蛋白的表达质粒并进行诱导表达,使用亲和层析、酶切、透析、离子交换层析、凝胶过滤层析等方法对目的蛋白进行纯化,使用SDS-PAGE和Western blot对蛋白进行分析和检测.[结果]通过优化将harp1基因密码子适应度值(CAI)从0.39提升到0.95.蛋白预测软件预测N末端21个氨基酸为信号肽,信号肽与成熟肽切割位点在第21位丙氨酸和第22位亮氨酸之间,成熟肽为第22位亮氨酸至第122位精氨酸.构建表达质粒pETDuet1-His6-MBP-3C-HARP1(22～122),IPTG能够诱导目的蛋白表达,使用Ni-NTA柱纯化出融合蛋白His6-MBP-3C-HARP1(22～122),3C蛋白酶能够切除His6-MBP标签,使用阴离子交换柱成功分离His6-MBP标签和HARP1(22～122)蛋白,使用Superdex 200 increase Gel Filtration Column进一步纯化获得单体HARP1(22～122)蛋白.[结论]成功建立HARP1蛋白体外表达与纯化体系.
文献关键词：
棉铃虫;效应蛋白;HARP1;表达;纯化
中图分类号：
作者姓名：
崔少勃;丁鲜;张峰
作者机构：
南京农业大学植物保护学院,江苏 南京210095
文献出处：
引用格式：
[1]崔少勃;丁鲜;张峰-.棉铃虫效应蛋白HARP1体外表达与纯化体系的建立)[J].南京农业大学学报,2022(02):280-286
A类：
HARP1,harp1,pETDuet1
B类：
棉铃虫,效应蛋白,体外表达,表达纯化,茉莉酸信号,信号途径,JAZ,基因序列,密码子优化,预测软件,软件预测,信号肽,信息构建,目的蛋白,质粒,诱导表达,亲和层析,离子交换层析,凝胶过滤层析,SDS,PAGE,blot,适应度值,CAI,切割位点,丙氨酸,亮氨酸,精氨酸,建表,His6,MBP,3C,IPTG,NTA,融合蛋白,阴离子交换柱,功分,Superdex,increase,Gel,Filtration,Column,蛋白体
AB值：
0.30531
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